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[求助]
荧光原位杂交实验求助
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我想做细菌的计数，用荧光原位杂交的方法，可是在荧光显微镜下‘；用40X镜头只看到DAPI紫外下的蓝色，而看不到探针绿光激发出的颜色，是没杂交上吗？基本在绿光下没有东西，诚心求各位研友帮忙解答下。我的实验步骤如下。 1、菌液稀释（大肠杆菌，肠球菌，乳酸菌），4%多聚甲醛固定1h，10000rpm离心5min，去上清，1XPBS重悬。重复两次。 2、玻片铬明胶处理 3、10μ菌液涂匀 4、37℃烘干 5、10xPBS洗两次，一次5min。 6、梯度乙醇脱水 6.1、加10μ 1mg/mL溶菌酶 6.2、37℃孵育15min 6.3、梯度乙醇脱水 7、加10μ蛋白酶K（1mg/mL） 8、37℃孵育半小时 9、梯度乙醇脱水 10、加杂交液，加盖玻片，湿盒中46℃预杂交30min 11、梯度乙醇脱水 12、加探针杂交液（EUB388探针），加盖玻片，46℃杂交过夜 13、预热到48℃洗脱液洗脱20min。然后DAPI染色。 14、荧光显微镜镜检。 |
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2楼2013-06-19 20:58:20
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