| 查看: 5197 | 回复: 15 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
羟脯氨酸的含量测定，急急急~
|
|||
|
各位虫友有人用紫外测出过胶原蛋白里面的羟脯氨酸的含量么？比较稳定的么？ 我试过几种方法，都失败了，请各位帮着想想是什么原因，有什么办法解决或者有更好的办法可以测出羟脯氨酸的？小虫不胜感激。 方法一 (l)7%氯胺T水溶液，暗室保存。 (2)醋酸一柠檬酸缓冲液(PH一6.0):579醋酸钠(CH3C00Na.3H2O)，37.59二水柠檬酸三钠，5.59一水柠檬酸，385mL异丙醇共同溶于水，定容至IL，室温保存。 (3)重结晶对二甲氨基苯甲醛溶于57%高氯酸，配成2:3(g:mL)溶液，棕色瓶保存三周有效。 (4)氧化剂A液:7%氯胺T:醋酸一柠檬酸缓冲液(V/V)=1:4，用前配制;显色剂B 液:对二甲氨基苯甲醛溶液:异丙醇(V/V)=3:13，用前配制。精确称取标品轻脯氨酸30mg定容于loomL，稀释10倍成为3omoL/L标准液。分别吸取omL，lmL，ZmL，3mL，4mL，5mL标准液定容至50mL，各自取定容后溶液lmL于试管中，向每只试管加入0.4mL异丙醇和0.2mLA液，搅拌3一5min，再分别向每只试管加入B液2.6mL，搅拌，60℃水浴25min，冷却，于558nm处比色。根据吸光值绘制标准曲线。 方法二 试剂的配制柠檬酸缓冲液:柠檬酸钠120g、冰醋酸12ml、柠檬酸46g、氢氧化 钠34g溶解于蒸馏水中，调整PH值至6.0，然后定容至1000mL。‘ 0.05mol/L氯胺T溶液:称取氯胺T7.05g，溶解于100mL蒸馏水中，然后加入 乙二醉独甲醚150mL，再加入250mL柠檬酸缓冲液混合均匀。 对二甲基氨基苯甲醛试剂A:取无水乙醇20mL，慢慢加入浓硫酸2.74ml;试剂 B:取对二甲基氨基苯甲醛12.0g，慢慢加入无水乙醇40mL，水浴加热使其完全溶解并冷却至室温，然后将A液慢慢加入B，混合均匀。 3.5mol/L高氯酸溶液:取27ml高氯酸，以蒸馏水定容到100mL。 羟脯氨酸标准储存液：准确称取L羟基脯氨酸标准品1OOmg，加入O.O1mol/L盐酸中溶解，稀释并定容到1OOmL.在冰箱中保存。羟脯氨酸标准工作液：吸取羟脯氨酸标准储存液1OmL到1OOmL容量瓶中，用蒸馏水定容到1OOmL(临用前配)，浓度为1OOug/mL. 吸取羟脯氨酸标准工作液I.O、2 0、2 5、3 0、3 5、40、4.5mL，分别用蒸馏水定容到1OOmL.以蒸馏水为空白，分别吸取上述标准液1mL.加入1mL柠檬酸缓冲液和1mL 0.05mol/L氯胺T溶液，室温(25℃)氧化1Omin后，加入高氯酸1mL(3.5mol/L)，放置1Omin，加入对二甲基氨基苯甲醛试剂1mL，在65℃水浴显色1Omin．冷却后在561nm处测吸光度。以羟脯氨酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，求出回归方程 方法三 ①pH6.8的柠檬酸缓冲溶液：溶解26.0g柠檬酸C6H8O7•H2O，14.0g氢氧化钠和78.0g醋酸钠于500mL水中，转移溶液到1000mL容量瓶中。加入250mL正丙醇，用水稀释至刻度。此液于4℃在深色瓶中保存，可稳定几个星期； ②氯胺T试剂：溶解1.41g氯胺T于100mL如上的缓冲试剂中（现配现用）； ③对二甲氨基苯甲醛试剂：称取10.0g对二甲氨基苯甲醛，溶解于35.0mL高氯酸 [60%(m/m)]，缓慢加入65.0mL异丙醇（现配现用）； ④羟脯氨酸标准储备液，500μg•mL-1：准确称取羟脯氨酸标准品50.0mg，用少量水溶解于100mL容量瓶中，加入一滴3mol•L-1硫酸，定容至刻度。该溶液在4℃下能稳定至少1月； ⑤羟脯氨酸标准工作液：吸取5mL羟脯氨酸标准储备液于500mL容量瓶中，用蒸馏 水稀释定容，质量浓度为5μg•mL-1（现配现用）。 羟脯氨酸标准曲线的绘制 准确吸取羟脯氨酸标准工作液10.0、20.0、30.0、40.0与50.0mL，分别用蒸馏水定容至100mL，此标准溶液的羟脯氨酸浓度分别为0.5、1.0、1.5、2.0和2.5μg•mL-1 ；吸取4mL上述稀释好的溶液于具塞试管中，加入2.00mL氯胺T，摇匀后在室温下放置20min，加入2.00mL显色剂，摇匀后迅速将试管移至60℃的水浴中，保温20min，再用流动的水冷却试管至少3min，室温下放置30min，最后用紫外可见分光光度计在558±2nm波长处测定吸光度，绘制标准曲线，建立线性回归方程。空白溶液用蒸馏水代替，过程同上。 方法一没有最后测的溶液是澄清的而且为黄色，测出的值也是不稳定忽高忽低。我用的是L-羟脯氨酸的标准品。 方法二 试剂B 出现不溶现象，加入的无水乙醇和对二甲基氨基苯甲醛分层，像油水分离的状态，下层发绿，油状，并且我的试剂是新买的。加完高氯酸后10min-20min试管会出现白色絮状物，最后沉底，包括空白组。 方法三 第一步加入正丙醇就会和盐溶液分层。正丙醇不溶盐，将盐析出。 |
回复此楼» 猜你喜欢
一志愿太原理工安全工程300分，求调剂
已经有5人回复
-
调剂求院校招收
已经有4人回复
-
求化学调剂
已经有4人回复
-
085600，材料与化工321分求调剂
已经有7人回复
-
一志愿武汉理工，总分321，英一数二，求老师收留。
已经有6人回复
-
考研调剂
已经有6人回复
-
0856求调剂
已经有12人回复
-
0703化学
已经有9人回复
-
0703化学求调剂
已经有10人回复
-
317求调剂
已经有6人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 真菌细胞壁几丁质含量测定，急！！
已经有5人回复
- 胶原蛋白含量测定
已经有8人回复
- 求二溴甲烷的含量测定方法！！！！
已经有3人回复
- 丙三醇含量测定
已经有6人回复
- 含量测定、有关物质测定都是平行针进样吗？
已经有11人回复
- 柠檬酸钠含量测定
已经有6人回复
- 含量测定浓度范围的确定
已经有13人回复
- 求助ICP测定分子筛中钠离子含量的问题，急急急。。。。
已经有8人回复
- 含量测定中方法学验证---回收率的问题 ？？？
已经有8人回复
- 胶原蛋白 羟脯氨酸
已经有8人回复
- GC含量测定相关问题，请教大家一下！！！
已经有5人回复
- 测定含量时一定要按照药典上规定的对照品浓度吗
已经有3人回复
- 【求助】多肽、氨基酸含量测定
已经有10人回复
- 【求助】药物含量测定
已经有3人回复
- 【求助】维生素K1含量测定
已经有10人回复
- 【求助】高价求助对甲苯磺酰氯的含量测定方法
已经有5人回复
- 【求助】芦丁含量测定
已经有5人回复
- 【求助】片剂片重 和含量测定
已经有5人回复
- 【求助】溶出度的测定方法和含量测定的方法不同，是为什么？
已经有13人回复
- 【求助】氨基酸含量测定
已经有13人回复
- 【讨论】关于原料药含量测定方法学验证的一些做法
已经有11人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
汕头大学 海洋科学-生物学-生物医药大量接受调剂
+1/195
-
南宁师范大学贺益苗课题组2026年招收有机化学和材料与化工专业拟招生4-5名硕士研究生
+1/184
-
多通道数据采集/线性功率放大器租赁｜自动化控制实验
+1/95
-
南方医科大学中药学院 调剂硕士生一名 中药学专业
+1/84
-
南方科技大学王鹏团队诚聘药物化学、化学探针、药物递送博士后
+1/79
-
沈阳农业大学生物与医药专硕招收调剂生！！！！！！！！！！
+1/37
-
【青岛大学】2026年生物与医药申请考核制博士生招生（含少数民族骨干人才）
+1/21
-
长安大学智能爆破课题组招收2026级博士和硕士研究生
+1/21
-
08开头有调剂需求的同学
+3/16
-
年薪约32-60万！成会明院士团队诚聘材料理论计算博士后（长期有效）
+1/15
-
三峡大学材料与化工学院调剂
+1/10
-
【博士招生】武汉科技大学招收材料、化工、环境、冶金类2026年“申请-考核”制博士生
+1/8
-
国家双一流高校-国家级青年人才课题组博士招生
+1/7
-
双一流天津工业大学电信学院李鸿强教授招收2026年申请审核制博士
+1/5
-
南开大学环境科学与工程学院王鑫教授课题组招收申请考核制博士生
+1/5
-
寻找26博士生导师
+1/4
-
岭南大学（香港）诚招Research Talent Hub人才（创新及科技基金研究人才库）
+1/4
-
香港中文大学 生物医学学院/组织工程与再生医学研究所 招聘博士后/研究助理
+1/2
-
教育部重点实验室招收2026年调剂生，化学、材料、机械、计算机等
+1/1
-
广东唯一石化院校——资源与环境专硕招生
+1/1
6楼2014-06-26 15:41:39
2楼2013-04-25 16:49:46
4楼2013-10-31 20:02:20
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
样品用6 M HCl在回流冷凝器中，温度为110 ◦C下水解24 h，然后用1号试纸过滤。将滤液pH用1 M NaOH溶液调到6.0–6.5。取上述样品0.1 mL于试管中，然后加入0.2 mL异丙醇充分混合，再加入0.1 mL氯胺 T (7 % ,w/v)和pH为6的醋酸盐/柠檬酸盐缓冲液(1:4, v/v)，充分混合。然后加入1.3 mL欧利希试剂（2 g p-二甲基氨基苯甲醛溶解于3 mL60% (v/v)的高氯酸中和13 mL的异丙醇）。上述混合液在60 ◦C水浴中加热25 min，然后在流动水中冷却2-3 min。溶液用异丙醇稀释至5 mL。以水作参比利用紫外分光光度计在558 nm处测定吸光值。 羟脯氨酸标准曲线：浓度范围在10 ~ 60 mg/L。羟脯氨酸含量以mg/g 样品表示。 这是外文方法~ 我自己翻译的哦！看看能不能帮到你！ |
5楼2013-11-12 19:40:56
