| 查看: 5204 | 回复: 15 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
羟脯氨酸的含量测定，急急急~
|
|||
|
各位虫友有人用紫外测出过胶原蛋白里面的羟脯氨酸的含量么？比较稳定的么？ 我试过几种方法，都失败了，请各位帮着想想是什么原因，有什么办法解决或者有更好的办法可以测出羟脯氨酸的？小虫不胜感激。 方法一 (l)7%氯胺T水溶液，暗室保存。 (2)醋酸一柠檬酸缓冲液(PH一6.0):579醋酸钠(CH3C00Na.3H2O)，37.59二水柠檬酸三钠，5.59一水柠檬酸，385mL异丙醇共同溶于水，定容至IL，室温保存。 (3)重结晶对二甲氨基苯甲醛溶于57%高氯酸，配成2:3(g:mL)溶液，棕色瓶保存三周有效。 (4)氧化剂A液:7%氯胺T:醋酸一柠檬酸缓冲液(V/V)=1:4，用前配制;显色剂B 液:对二甲氨基苯甲醛溶液:异丙醇(V/V)=3:13，用前配制。精确称取标品轻脯氨酸30mg定容于loomL，稀释10倍成为3omoL/L标准液。分别吸取omL，lmL，ZmL，3mL，4mL，5mL标准液定容至50mL，各自取定容后溶液lmL于试管中，向每只试管加入0.4mL异丙醇和0.2mLA液，搅拌3一5min，再分别向每只试管加入B液2.6mL，搅拌，60℃水浴25min，冷却，于558nm处比色。根据吸光值绘制标准曲线。 方法二 试剂的配制柠檬酸缓冲液:柠檬酸钠120g、冰醋酸12ml、柠檬酸46g、氢氧化 钠34g溶解于蒸馏水中，调整PH值至6.0，然后定容至1000mL。‘ 0.05mol/L氯胺T溶液:称取氯胺T7.05g，溶解于100mL蒸馏水中，然后加入 乙二醉独甲醚150mL，再加入250mL柠檬酸缓冲液混合均匀。 对二甲基氨基苯甲醛试剂A:取无水乙醇20mL，慢慢加入浓硫酸2.74ml;试剂 B:取对二甲基氨基苯甲醛12.0g，慢慢加入无水乙醇40mL，水浴加热使其完全溶解并冷却至室温，然后将A液慢慢加入B，混合均匀。 3.5mol/L高氯酸溶液:取27ml高氯酸，以蒸馏水定容到100mL。 羟脯氨酸标准储存液：准确称取L羟基脯氨酸标准品1OOmg，加入O.O1mol/L盐酸中溶解，稀释并定容到1OOmL.在冰箱中保存。羟脯氨酸标准工作液：吸取羟脯氨酸标准储存液1OmL到1OOmL容量瓶中，用蒸馏水定容到1OOmL(临用前配)，浓度为1OOug/mL. 吸取羟脯氨酸标准工作液I.O、2 0、2 5、3 0、3 5、40、4.5mL，分别用蒸馏水定容到1OOmL.以蒸馏水为空白，分别吸取上述标准液1mL.加入1mL柠檬酸缓冲液和1mL 0.05mol/L氯胺T溶液，室温(25℃)氧化1Omin后，加入高氯酸1mL(3.5mol/L)，放置1Omin，加入对二甲基氨基苯甲醛试剂1mL，在65℃水浴显色1Omin．冷却后在561nm处测吸光度。以羟脯氨酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，求出回归方程 方法三 ①pH6.8的柠檬酸缓冲溶液：溶解26.0g柠檬酸C6H8O7•H2O，14.0g氢氧化钠和78.0g醋酸钠于500mL水中，转移溶液到1000mL容量瓶中。加入250mL正丙醇，用水稀释至刻度。此液于4℃在深色瓶中保存，可稳定几个星期； ②氯胺T试剂：溶解1.41g氯胺T于100mL如上的缓冲试剂中（现配现用）； ③对二甲氨基苯甲醛试剂：称取10.0g对二甲氨基苯甲醛，溶解于35.0mL高氯酸 [60%(m/m)]，缓慢加入65.0mL异丙醇（现配现用）； ④羟脯氨酸标准储备液，500μg•mL-1：准确称取羟脯氨酸标准品50.0mg，用少量水溶解于100mL容量瓶中，加入一滴3mol•L-1硫酸，定容至刻度。该溶液在4℃下能稳定至少1月； ⑤羟脯氨酸标准工作液：吸取5mL羟脯氨酸标准储备液于500mL容量瓶中，用蒸馏 水稀释定容，质量浓度为5μg•mL-1（现配现用）。 羟脯氨酸标准曲线的绘制 准确吸取羟脯氨酸标准工作液10.0、20.0、30.0、40.0与50.0mL，分别用蒸馏水定容至100mL，此标准溶液的羟脯氨酸浓度分别为0.5、1.0、1.5、2.0和2.5μg•mL-1 ；吸取4mL上述稀释好的溶液于具塞试管中，加入2.00mL氯胺T，摇匀后在室温下放置20min，加入2.00mL显色剂，摇匀后迅速将试管移至60℃的水浴中，保温20min，再用流动的水冷却试管至少3min，室温下放置30min，最后用紫外可见分光光度计在558±2nm波长处测定吸光度，绘制标准曲线，建立线性回归方程。空白溶液用蒸馏水代替，过程同上。 方法一没有最后测的溶液是澄清的而且为黄色，测出的值也是不稳定忽高忽低。我用的是L-羟脯氨酸的标准品。 方法二 试剂B 出现不溶现象，加入的无水乙醇和对二甲基氨基苯甲醛分层，像油水分离的状态，下层发绿，油状，并且我的试剂是新买的。加完高氯酸后10min-20min试管会出现白色絮状物，最后沉底，包括空白组。 方法三 第一步加入正丙醇就会和盐溶液分层。正丙醇不溶盐，将盐析出。 |
回复此楼» 猜你喜欢
调剂310
已经有11人回复
-
300求调剂，材料科学英一数二
已经有9人回复
-
296求调剂
已经有3人回复
-
一志愿南昌大学324求调剂
已经有3人回复
-
299求调剂
已经有9人回复
-
22408 359分调剂
已经有6人回复
-
085600 材料与化工 329分求调剂
已经有12人回复
-
一志愿北京化工大学材料与化工（085600）296求调剂
已经有14人回复
-
085601材料工程找调剂
已经有11人回复
-
总分293求调剂
已经有9人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 真菌细胞壁几丁质含量测定，急！！
已经有5人回复
- 胶原蛋白含量测定
已经有8人回复
- 求二溴甲烷的含量测定方法！！！！
已经有3人回复
- 丙三醇含量测定
已经有6人回复
- 含量测定、有关物质测定都是平行针进样吗？
已经有11人回复
- 柠檬酸钠含量测定
已经有6人回复
- 含量测定浓度范围的确定
已经有13人回复
- 求助ICP测定分子筛中钠离子含量的问题，急急急。。。。
已经有8人回复
- 含量测定中方法学验证---回收率的问题 ？？？
已经有8人回复
- 胶原蛋白 羟脯氨酸
已经有8人回复
- GC含量测定相关问题，请教大家一下！！！
已经有5人回复
- 测定含量时一定要按照药典上规定的对照品浓度吗
已经有3人回复
- 【求助】多肽、氨基酸含量测定
已经有10人回复
- 【求助】药物含量测定
已经有3人回复
- 【求助】维生素K1含量测定
已经有10人回复
- 【求助】高价求助对甲苯磺酰氯的含量测定方法
已经有5人回复
- 【求助】芦丁含量测定
已经有5人回复
- 【求助】片剂片重 和含量测定
已经有5人回复
- 【求助】溶出度的测定方法和含量测定的方法不同，是为什么？
已经有13人回复
- 【求助】氨基酸含量测定
已经有13人回复
- 【讨论】关于原料药含量测定方法学验证的一些做法
已经有11人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
五邑大学（江门-利物浦公共卫生研究所）招收药学、生物医药专业调剂生
+1/131
-
2026年武汉纺织大学国家杰青课题组招收调剂化学 生物 医学 食品 环境研究生
+1/95
-
南京医科大学生殖医学与子代健康国重实验室-董飞宏课题组-2026年博士招生-9月入学
+1/81
-
0854电子信息调剂，闽南师范大学光电芯片研发小组
+1/47
-
烟台大学环境与材料工程学院新能源材料课题组招硕士研究生
+1/41
-
沈阳农业大学生物与医药招收调剂生！！！！！！！！！！
+1/35
-
上海大学 “生物有机电子材料及器件”团队硕士、博士研究生招聘
+1/35
-
招聘科研助理——储能方向（储能、流体传热、CFD模拟）
+1/18
-
双一流大学湘潭大学“化工过程模拟与强化”国家地方联合工程研究中心招收各类博士生
+1/16
-
双一流大学湘潭大学“化工过程模拟与强化”国家地方联合工程研究中心招收博士生
+1/14
-
南昌航空大学 材料学院 招材料类调剂研究生，名额多，上岸机会大
+1/11
-
2026年材料/冶金/化工硕士调剂-上海大学全国重点实验室-激光冶金与硅基材料制备
+1/10
-
苏州初创公司诚聘有机合成化学家
+1/8
-
墨尔本大学伯明翰大学联合全奖国际博士生
+1/5
-
长江师范学院化学化工学院2026年硕士研究生接收调剂的通知
+1/4
-
青岛大学物理科学学院国家级人才团队招收材料、物理、能源等相关专业调剂硕士研究生
+1/3
-
招收2026级研究生
+1/2
-
香港中文大学 生物医学学院/组织工程与再生医学研究所 招聘博士后/研究助理
+1/2
-
博士招生 | 青岛科技大学（高分子、化学、材料、力学、航天、机电工程、计算机仿真）
+1/1
-
易度层流质量流量计在航空发动机压缩空气测试中的应用
+1/1
6楼2014-06-26 15:41:39
2楼2013-04-25 16:49:46
4楼2013-10-31 20:02:20
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
样品用6 M HCl在回流冷凝器中，温度为110 ◦C下水解24 h，然后用1号试纸过滤。将滤液pH用1 M NaOH溶液调到6.0–6.5。取上述样品0.1 mL于试管中，然后加入0.2 mL异丙醇充分混合，再加入0.1 mL氯胺 T (7 % ,w/v)和pH为6的醋酸盐/柠檬酸盐缓冲液(1:4, v/v)，充分混合。然后加入1.3 mL欧利希试剂（2 g p-二甲基氨基苯甲醛溶解于3 mL60% (v/v)的高氯酸中和13 mL的异丙醇）。上述混合液在60 ◦C水浴中加热25 min，然后在流动水中冷却2-3 min。溶液用异丙醇稀释至5 mL。以水作参比利用紫外分光光度计在558 nm处测定吸光值。 羟脯氨酸标准曲线：浓度范围在10 ~ 60 mg/L。羟脯氨酸含量以mg/g 样品表示。 这是外文方法~ 我自己翻译的哦！看看能不能帮到你！ |
5楼2013-11-12 19:40:56
