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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 活化形式的蛋白凋亡MARKER 如 caspase-3 parp 如何办
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2008liulin

铁虫 (著名写手)

[求助] 活化形式的蛋白凋亡MARKER 如 caspase-3 parp 如何办

如题，其实这个问题已经看过很多解释了，但是现在又面临这个问题，实在不知如何解决为好。
我买的是CST的抗体，PARP CASPASE-3 这两个抗体都是技能显示出总蛋白也能显示出活化形式的蛋白，所以我在PAPER 中显示时所有的FIGURES 中都包含了两个带，活化形式和未活化形式。问题是：

review 说我的凋亡显影不明显（几乎所有），事实上我觉得是明显的，另外一个review 也没有提到这个问题。所以我怀疑这个审稿人是不是只看未活化形式，没有看到剪切形式。（有些条带未活化形式是没有什么改变的，但是活化形式很明显）。现在我想把FIGURE 中所有的未活化形式都去除，只保留活化形式，不知道可以不可以？有师兄说，这样子会让审稿人觉得不好，不赞成这种做法。所以，纠结了，也不想好心改过去结果 被人家误解，直接被拒，现在是大修。主要问题也是处在这个审稿人身上，另外一个问题很少。 所以，怎么办？急求大神！
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1楼 2013-01-30 21:25:05
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2008liulin

铁虫 (著名写手)
2楼2013-01-31 09:45:31
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2008liulin

铁虫 (著名写手)
3楼2013-02-03 12:53:03
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ccharlien

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-02-05 22:11:58
是不是你的图上标记的不清楚审稿人没注意到？
1.你现在样品还有，需要重复的实验量不多，可以买个Cleaved Caspase 3抗体重复你的实验，再用个别的方法检测凋亡
2.没法重复试验，选一张和原来文章里面不同的图，只显示活化蛋白，把标记做好，在信里解释清楚，被拒了就果断换杂志
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4楼2013-02-03 21:06:05
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2008liulin

铁虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ccharlien at 2013-02-03 21:06:05
是不是你的图上标记的不清楚审稿人没注意到？
1.你现在样品还有，需要重复的实验量不多，可以买个Cleaved Caspase 3抗体重复你的实验，再用个别的方法检测凋亡
2.没法重复试验，选一张和原来文章里面不同的图，只 ...

我太感谢你了！我的意思也是 我就把原来形式的给切了， 然后只放活化形式，并且在条带下面LABLE，让他能看清楚一下。怕就怕他把我拒了，我六月毕业，来不及了，怕有万一就麻烦了。~~~愁死了~~~ 我再补图，怕那个人还说不清楚，那我就比较郁闷了~~~愁死了
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5楼2013-02-03 23:01:49
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ccharlien

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 2008liulin at 2013-02-03 23:01:49
我太感谢你了！我的意思也是 我就把原来形式的给切了， 然后只放活化形式，并且在条带下面LABLE，让他能看清楚一下。怕就怕他把我拒了，我六月毕业，来不及了，怕有万一就麻烦了。~~~愁死了~~~ 我再补图，怕那个人 ...

不客气哈，一般用两个不同方法检测凋亡就没什么问题了
最好有和之前稿子里差不多质量的不一样的图，省得人看到后觉得你没改找茬，不过要是没有也就算了
把reviewer提到的其他问题都搞定了尽快重新提交，祝好运！
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6楼2013-02-04 01:23:09
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乖乖宝贝

金虫 (小有名气)
楼主你好！我也在做这两个蛋白，用的抗体和你一样，可是我的切割形式总是不出现，或者是说和我药物浓度不成规律。我想问下你，药物作用细胞的时间点和出现切割条带之间有关系吗？而且对于Caspase-3 (35KD和17KD)和PRAP(116和85)，是在一样的实验条件下，同一张膜上做出来的吗？还是把总蛋白和切割形式的在胶上切开，分别转膜哦？我做这两个蛋白老是做不好，觉得很郁闷，你能不能告诉我一些你的经验哦？
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尽自己最大的努力，优秀毕业！
7楼2013-02-19 14:22:51
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2008liulin

铁虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 乖乖宝贝 at 2013-02-19 14:22:51
楼主你好！我也在做这两个蛋白，用的抗体和你一样，可是我的切割形式总是不出现，或者是说和我药物浓度不成规律。我想问下你，药物作用细胞的时间点和出现切割条带之间有关系吗？而且对于Caspase-3 (35KD和17KD)和P ...

你好！1、没有活化形式的带你就找个阳性对照，一定有凋亡的，看看来验证你的样品问题还是抗体问题 2、是在一张膜上做出来的，转完膜箭膜就是了。
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8楼2013-02-20 15:38:40
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choukeitou

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 乖乖宝贝 at 2013-02-19 15:22:51
楼主你好！我也在做这两个蛋白，用的抗体和你一样，可是我的切割形式总是不出现，或者是说和我药物浓度不成规律。我想问下你，药物作用细胞的时间点和出现切割条带之间有关系吗？而且对于Caspase-3 (35KD和17KD)和P ...

对于同时检测Caspase-3 (35KD和17KD)和PRAP(116和85)的问题， 转膜后，先做
Caspase-3 (35KD和17KD)的抗体反应，完了用glycine 洗一下，再做PRAP(116和85)的抗体反映。
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9楼2013-02-20 22:03:02
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2008liulin

铁虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by choukeitou at 2013-02-20 22:03:02
对于同时检测Caspase-3 (35KD和17KD)和PRAP(116和85)的问题， 转膜后，先做
Caspase-3 (35KD和17KD)的抗体反应，完了用glycine 洗一下，再做PRAP(116和85)的抗体反映。...

剪开不就行了吗?
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10楼2013-02-21 15:19:50
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