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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 活化形式的蛋白凋亡MARKER 如 caspase-3 parp 如何办
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乖乖宝贝

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 2008liulin at 2013-02-20 15:38:40
你好！1、没有活化形式的带你就找个阳性对照，一定有凋亡的，看看来验证你的样品问题还是抗体问题 2、是在一张膜上做出来的，转完膜箭膜就是了。...

哦，我想可能是我蛋白浓度比较低，3mg每微升，切割型的表达相对较低，所以出不来。我用恒流250mA，湿转30min,0.22mm的膜，丽春红染色35KD的都很清楚了。我还想问问楼主，就是启动caspase-3，是不是收集细胞的时间也重要.
我做PARP ，85KD的出来了，但是目标条带和上下的杂带连在一起。我用CST的一抗，总是只有杂带。有没有什么方法可以让不同分子量的蛋白之间分得更加开一点。我用10%的胶，60V浓缩80V分离？太感谢楼主了……
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尽自己最大的努力，优秀毕业！
11楼2013-02-21 17:27:29
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2008liulin

铁虫 (著名写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 乖乖宝贝 at 2013-02-21 17:27:29
哦，我想可能是我蛋白浓度比较低，3mg每微升，切割型的表达相对较低，所以出不来。我用恒流250mA，湿转30min,0.22mm的膜，丽春红染色35KD的都很清楚了。我还想问问楼主，就是启动caspase-3，是不是收集细胞的时间也 ...

10%胶 120v 跑到loading 马上要跑下去就停下 大概90-100min 因为跑出去的话 caspase-3 的15KD 就看不到了。这样应该可以分开的。CST抗体还好吧 杂带应该还好
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12楼2013-02-22 12:01:06
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