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2008liulin

铁虫 (著名写手)

[求助] 活化形式的蛋白凋亡MARKER 如 caspase-3 parp 如何办

如题,其实这个问题已经看过很多解释了,但是现在又面临这个问题,实在不知如何解决为好。
我买的是CST的抗体,PARP CASPASE-3 这两个抗体都是技能显示出总蛋白也能显示出活化形式的蛋白,所以我在PAPER 中显示时所有的FIGURES 中都包含了两个带,活化形式和未活化形式。问题是:

review 说我的凋亡显影不明显(几乎所有),事实上我觉得是明显的,另外一个review 也没有提到这个问题。所以我怀疑这个审稿人是不是只看未活化形式,没有看到剪切形式。(有些条带未活化形式是没有什么改变的,但是活化形式很明显)。现在我想把FIGURE 中所有的未活化形式都去除,只保留活化形式,不知道可以不可以?有师兄说,这样子会让审稿人觉得不好,不赞成这种做法。所以,纠结了,也不想好心改过去结果 被人家误解,直接被拒,现在是大修。主要问题也是处在这个审稿人身上,另外一个问题很少。 所以,怎么办?急求大神!
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ccharlien

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 2008liulin at 2013-02-03 23:01:49
我太感谢你了!我的意思也是 我就把原来形式的给切了, 然后只放活化形式,并且在条带下面LABLE,让他能看清楚一下。怕就怕他把我拒了,我六月毕业,来不及了,怕有万一就麻烦了。~~~愁死了~~~ 我再补图,怕那个人 ...

不客气哈,一般用两个不同方法检测凋亡就没什么问题了
最好有和之前稿子里差不多质量的不一样的图,省得人看到后觉得你没改找茬,不过要是没有也就算了
把reviewer提到的其他问题都搞定了尽快重新提交,祝好运!
6楼2013-02-04 01:23:09
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ccharlien

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-02-05 22:11:58
是不是你的图上标记的不清楚审稿人没注意到?
1.你现在样品还有,需要重复的实验量不多,可以买个Cleaved Caspase 3抗体重复你的实验,再用个别的方法检测凋亡
2.没法重复试验,选一张和原来文章里面不同的图,只显示活化蛋白,把标记做好,在信里解释清楚,被拒了就果断换杂志
4楼2013-02-03 21:06:05
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2008liulin

铁虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ccharlien at 2013-02-03 21:06:05
是不是你的图上标记的不清楚审稿人没注意到?
1.你现在样品还有,需要重复的实验量不多,可以买个Cleaved Caspase 3抗体重复你的实验,再用个别的方法检测凋亡
2.没法重复试验,选一张和原来文章里面不同的图,只 ...

我太感谢你了!我的意思也是 我就把原来形式的给切了, 然后只放活化形式,并且在条带下面LABLE,让他能看清楚一下。怕就怕他把我拒了,我六月毕业,来不及了,怕有万一就麻烦了。~~~愁死了~~~ 我再补图,怕那个人还说不清楚,那我就比较郁闷了~~~愁死了
5楼2013-02-03 23:01:49
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乖乖宝贝

金虫 (小有名气)

楼主你好!我也在做这两个蛋白,用的抗体和你一样,可是我的切割形式总是不出现,或者是说和我药物浓度不成规律。我想问下你,药物作用细胞的时间点和出现切割条带之间有关系吗?而且对于Caspase-3 (35KD和17KD)和PRAP(116和85),是在一样的实验条件下,同一张膜上做出来的吗?还是把总蛋白和切割形式的在胶上切开,分别转膜哦?我做这两个蛋白老是做不好,觉得很郁闷,你能不能告诉我一些你的经验哦?
尽自己最大的努力,优秀毕业!
7楼2013-02-19 14:22:51
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