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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白质总量，变还是不变！？
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lhliu2087

银虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
建议在同一张膜上做磷酸化和总量的表达
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21楼2013-01-30 18:47:39
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ccharlien

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
20楼: Originally posted by summer2771 at 2013-01-30 17:45:08
呵呵，我是这个意思，某个蛋白不是会有蛋白总量的抗体和磷酸化位点的抗体嘛。我是问有没有可能会蛋白总量的表达下降而用磷酸化位点做出来的表达却是上升趋势（磷酸化位点的表达/总量才是磷酸化或者说是磷酸化率呗， ...

1.Western做的倍数只是看看的，表示这一次实验在这种特定情况下的倍数，并不表示实际量的倍数。换个同样位点的磷酸化抗体，换个稀释度，换个曝光时间，数据的偏差会很大，所以说western把图放上去就行了，有没差别差别有多大一目了然，做灰度什么的也就撑撑篇幅。而且我觉得在一张膜上做一次是必要的。
2.选用的内参的量在处理下改变不改变也是需要确定的因素，为了数据的严谨做一组内参的筛选可以确保可靠。
不过如果实验都做完了的话也无所谓了，把数据卖个好价钱就行
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22楼2013-01-30 20:52:47
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summer2771

木虫 (正式写手)
引用回帖:
21楼: Originally posted by lhliu2087 at 2013-01-30 18:47:39
建议在同一张膜上做磷酸化和总量的表达

感谢您的回帖与建议！
只是实际操作中往往没有一起做，磷酸化跟总量还是有些差别...
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23楼2013-01-31 00:38:50
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summer2771

木虫 (正式写手)
引用回帖:
22楼: Originally posted by ccharlien at 2013-01-30 20:52:47
1.Western做的倍数只是看看的，表示这一次实验在这种特定情况下的倍数，并不表示实际量的倍数。换个同样位点的磷酸化抗体，换个稀释度，换个曝光时间，数据的偏差会很大，所以说western把图放上去就行了，有没差别 ...

恩，兄弟说的很实在！
第一次做WB，也是第一次来分析WB
感觉WB影响因素还是很多，不是那么靠谱。
Anyway,做完了，好好写，看自己怎么圆了！
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24楼2013-01-31 00:40:31
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蓝天_1988

金虫 (小有名气)
一般是先磷酸化，在总蛋白，最后内参。
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25楼2013-04-04 10:26:06
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a173968976

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
21楼: Originally posted by lhliu2087 at 2013-01-30 18:47:39
建议在同一张膜上做磷酸化和总量的表达

怎么做啊？求助。。
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26楼2015-05-06 18:04:29
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a173968976

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
25楼: Originally posted by 蓝天_1988 at 2013-04-04 10:26:06
一般是先磷酸化，在总蛋白，最后内参。

27楼2015-05-06 18:09:20
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