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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Xho I 和Not I双酶切后电泳出现严重拖尾
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liurz

金虫 (正式写手)

[求助] Xho I 和Not I双酶切后电泳出现严重拖尾

Xho I 和Not I双酶切后电泳出现严重拖尾，如图分别是酶切前后图片。请分析一下原因谢谢。酶切体系为20ul，其中两内切酶各1ul，酶为NEB公司产品。

酶切前.jpg



酶切后.jpg

[ Last edited by liurz on 2013-1-24 at 22:38 ]
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1楼 2013-01-24 22:35:16
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liurz

金虫 (正式写手)
引用回帖:
22楼: Originally posted by haitian0625 at 2013-01-26 00:53:27
个人觉得你酶切前上样可以少上些，这样利于你根据marker估计样品浓度；50ul体系，10U就够了；若你只是切掉两端保护碱基、酶切前后片段差不多大小的话，那你酶切后图谱应该是切得多了。所以，可减少酶量、减少酶切时 ...

昨天已经把时间减少到2h，至于酶量，还是按NEB推荐剂量，等会看结果怎么样。
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24楼2013-01-26 12:31:14
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XOooZzz

银虫 (小有名气)
酶切不完全。酶切完全时，片段之间的亮度比例应该与片段的大小成正比。
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2楼2013-01-25 08:22:49
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liurz: 金币+1, ★有帮助 2013-01-25 14:31:11
感觉是酶切体系中质粒用量太大。你的质粒看起来浓度不错，20ul酶切体系里面你放了多少ug质粒？
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3楼2013-01-25 08:34:07
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yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liurz: 金币+1, ★有帮助 2013-01-25 14:31:22
质粒的量过多，适当减少质粒
另外酶切体系可适当增大到40ul
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4楼2013-01-25 08:55:25
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