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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR扩增不出目的条带
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深蓝色竹子

新虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增不出目的条带

我是用cDNA为模板（已经确定没问题），进行扩增1500bp的基因，都换了两次引物了，每次都会在500bp左右扩增出很亮的条带，阴性对照也有这条带，但是目的条带几乎木有，都一个月了，就是扩增不出来，请各位给予指导

dell 2013-01-15 18hr 38min.jpg
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1楼 2013-01-24 19:44:21
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casey200788

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

把你的引物blast一下，看是不是对你的目的片段是特异的，如果你是针对目的片段设计的引物，就可能在其它位置有非特异性扩增。另外可以提高退火温度试试。。。。。
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12楼2013-01-29 04:44:46
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深蓝色竹子

新虫 (小有名气)
我用的是5000Maker，大小一次为5000,3000,2000,1000,750,500，250，100，我用的是高保真的酶，Mix也用过同样的情况！
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2楼2013-01-24 19:46:23
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yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
换用GC rich buffer试一试，可能是产物GC含量高
另外，你有不止一对引物，可以尝试巢氏PCR
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3楼2013-01-24 20:12:23
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深蓝色竹子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yesali at 2013-01-24 20:12:23
换用GC rich buffer试一试，可能是产物GC含量高
另外，你有不止一对引物，可以尝试巢氏PCR

我是扩增的全长，要做表达的，但是我的目的记忆总的GC含量才43%，应该不算太高吧
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4楼2013-01-24 21:43:36
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