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fayzhao

金虫 (小有名气)

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[求助] 双酶切后切胶回收

各位虫友好：
目前，我正在做质粒双酶切，体系40ul：
dd水                      补足40ul
10Xtango buffer    4ul
质粒                      2ug
kpnI                      2ul
bglII                      2ul
37℃反应5h,电泳检测图如下：

目的是为了回收目的条带（300多bp），切胶回收用了takara的和axygen的，都没有回收到，跑胶没有任何条带。接下来我要做的是将目的基因连接到表达载体中，回收不到怎么办哪？求帮助！！！

2013-1-20双酶切_副本.jpg

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1楼2013-01-23 17:10:19

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fayzhao

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引用回帖:

27楼: Originally posted by mascotte at 2013-01-30 14:01:48
看了你的实验结果，感觉你的酶切效率不高。kpnI 和Bgl II做双酶切时要同时考虑两种酶的活性，采用合适的buffer。fermentas的kpn I 酶活性并不高，并需要使用其公司特制的buffer，具体请见链接（http://www.thermosc ...

我试过分步酶切，但是没有这种双酶切体系的结果好，所以最后我采用的是双酶切。1ugDNA只需要1unit的酶吗？我看到的是说1ugDNA需要1ul的酶呀，并且我用这个体系进行酶切的时候，5小时才能切完啊……