应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切后切胶回收
53/1返回列表
查看: 4884  |  回复: 34
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

fayzhao

金虫 (小有名气)

[求助] 双酶切后切胶回收

各位虫友好：
目前，我正在做质粒双酶切，体系40ul：
dd水                       补足40ul
10Xtango buffer     4ul
质粒                       2ug
kpnI                        2ul
bglII                        2ul
37℃反应5h,电泳检测图如下：

目的是为了回收目的条带（300多bp），切胶回收用了takara的和axygen的，都没有回收到，跑胶没有任何条带。接下来我要做的是将目的基因连接到表达载体中，回收不到怎么办哪？求帮助！！！

2013-1-20双酶切_副本.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-01-23 17:10:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fayzhao

金虫 (小有名气)
引用回帖:
27楼: Originally posted by mascotte at 2013-01-30 14:01:48
看了你的实验结果，感觉你的酶切效率不高。kpnI 和Bgl II做双酶切时要同时考虑两种酶的活性，采用合适的buffer。fermentas的kpn I 酶活性并不高，并需要使用其公司特制的buffer，具体请见链接（http://www.thermosc ...

我试过分步酶切，但是没有这种双酶切体系的结果好，所以最后我采用的是双酶切。1ugDNA只需要1unit的酶吗？我看到的是说1ugDNA需要1ul的酶呀，并且我用这个体系进行酶切的时候，5小时才能切完啊……
赞一下 回复此楼
28楼2013-01-30 14:14:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 35 个回答

转基因猴子

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-23 18:55:12
fayzhao: 金币+1 2013-01-23 18:55:27
你得把marker的条带标出来。和提质粒一样，最后一步洗脱之前的酒精去除比较重要。切胶时不要切太多无用胶进去，影响回收效率。之前我也遇到过这个问题，提高浓度比较重要
赞一下 回复此楼
我还年轻，我要上路！
2楼2013-01-23 17:55:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fayzhao

金虫 (小有名气)
fayzhao: 回帖置顶 2013-01-23 18:54:47
补充：marker条带分别为2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp、100bp
赞一下 回复此楼
3楼2013-01-23 18:54:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fayzhao

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 转基因猴子 at 2013-01-23 17:55:50
你得把marker的条带标出来。和提质粒一样，最后一步洗脱之前的酒精去除比较重要。切胶时不要切太多无用胶进去，影响回收效率。之前我也遇到过这个问题，提高浓度比较重要

我把产物全部进行回收，回收胶在切胶的紫外下都看不到目的条带了……基本都没法切，最后我还是切了，最后检测什么也没有回收到。
那你最后怎么解决的呢？怎么提高浓度？提高质粒的浓度还是什么？谢谢啦
赞一下 回复此楼
4楼2013-01-23 18:58:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 35 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 4/200 2026-09-30 16:45 by Z9YWQ5EAO3qp
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 4/200 2026-09-30 16:33 by Z9YWQ5EAO3qp
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 cqwQDCxMcL3I 2026-09-29 6/300 2026-09-30 16:14 by Z9YWQ5EAO3qp
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意！ +10 zju2000 2026-09-26 13/650 2026-09-30 10:26 by yexuqing
[有机交流] 同一个分子，一条来自文献，一条来自AI——不告诉你答案，你会选哪条？ +4 tianxiaoxian 2026-09-28 7/350 2026-09-30 08:34 by 88817753
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-29 19:27 by cqwQDCxMcL3I
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:54 by yCO1Ll7aHtsw
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:47 by yCO1Ll7aHtsw
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:37 by etmYJ6d2rquH
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 4/200 2026-09-29 15:15 by etmYJ6d2rquH
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:58 by etmYJ6d2rquH
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 6/300 2026-09-29 14:41 by etmYJ6d2rquH
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:30 by etmYJ6d2rquH
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 7/350 2026-09-29 14:07 by etmYJ6d2rquH
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 4/200 2026-09-29 09:49 by JzYBbHIXWSrW
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:42 by ZvyPK8n6Nfki
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:46 by b8fCuTHqckEt
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:12 by b8fCuTHqckEt
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:15 by ez6fGg9abYaj
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭