24小时热门版块排行榜    

查看: 2108  |  回复: 13
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看

shiliyusly

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2013-01-23 10:56:02
我们一般都不用普通PCR摸索一下退火温度,用的是Taq酶,然后再上qRT-PCR,按照一般标准,20ul体系,SYBR染料,溶解曲线不是一个峰的话,说明有引物二聚体,我认为只要普通PCR做的时候没有引物二聚体,qRT-PCR也不会 ...

谢谢!有些引物二聚体是不是可以忽略呢?40多个循环
11楼2013-01-23 11:09:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-01-23 16:12:15
shiliyusly: 金币+2, 有帮助 2013-01-23 19:41:25
引用回帖:
10楼: Originally posted by shiliyusly at 2013-01-23 11:03:12
非常感谢!但我主要做的是比较不同品种的同个基因的相对定量,那是不是对单峰,扩增效率的要求就不需要那么高了呢,因为不同品种都一样,不是最优大家都不是最优。...

不知道你怎样得到这种想法的。在我看来,如果扩增出来的产物不单一的引物不能用做定量。因为定量的时候测的是荧光。如果除了目的产物之外有其它东西也会发出荧光,读出的CT是不准确的。
你说如果不是最优的话大家都不是最优也有问题的。不能小看这个小峰的。你会发现目标mRNA丰度高的样品小峰相对会比较低,对那些丰度低的样品非特异扩增和引物二聚体的峰会更明显。
我建议你多设计几对引物,选一对最好的做实验。
12楼2013-01-23 14:36:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shiliyusly

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-23 14:36:33
不知道你怎样得到这种想法的。在我看来,如果扩增出来的产物不单一的引物不能用做定量。因为定量的时候测的是荧光。如果除了目的产物之外有其它东西也会发出荧光,读出的CT是不准确的。
你说如果不是最优的话大家 ...

我这个是听仪器技术支持说的。那只能重新设计引物了。非常感谢你!
13楼2013-01-23 19:41:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhlf1989513

金虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by shiliyusly at 2013-01-23 11:09:54
谢谢!有些引物二聚体是不是可以忽略呢?40多个循环...

肯定不能忽略啊。。。会影响Ct值的。。到时候计算出的结果就不太可靠了。。。重新设计引物吧。。。
keepon
14楼2013-01-23 21:10:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 shiliyusly 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 听说今天filecode变了 +25 布布和一二 2026-08-06 48/2400 2026-08-11 11:37 by since—2010
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +5 布布和一二 2026-08-10 6/300 2026-08-11 10:15 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +9 documentary 2026-08-10 9/450 2026-08-11 10:08 by wk7465
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 13/650 2026-08-11 09:49 by 家与远方
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +5 瞬息宇宙 2026-08-10 5/250 2026-08-11 09:29 by 铁帽子农民
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 8月时间戳变的,举个手。玩一下,释放压力 +11 archvillain 2026-08-04 13/650 2026-08-10 14:41 by seekfind
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
信息提示
请填处理意见