24小时热门版块排行榜    

查看: 1860  |  回复: 13
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看

shiliyusly

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2013-01-23 10:56:02
我们一般都不用普通PCR摸索一下退火温度,用的是Taq酶,然后再上qRT-PCR,按照一般标准,20ul体系,SYBR染料,溶解曲线不是一个峰的话,说明有引物二聚体,我认为只要普通PCR做的时候没有引物二聚体,qRT-PCR也不会 ...

谢谢!有些引物二聚体是不是可以忽略呢?40多个循环
11楼2013-01-23 11:09:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-01-23 16:12:15
shiliyusly: 金币+2, 有帮助 2013-01-23 19:41:25
引用回帖:
10楼: Originally posted by shiliyusly at 2013-01-23 11:03:12
非常感谢!但我主要做的是比较不同品种的同个基因的相对定量,那是不是对单峰,扩增效率的要求就不需要那么高了呢,因为不同品种都一样,不是最优大家都不是最优。...

不知道你怎样得到这种想法的。在我看来,如果扩增出来的产物不单一的引物不能用做定量。因为定量的时候测的是荧光。如果除了目的产物之外有其它东西也会发出荧光,读出的CT是不准确的。
你说如果不是最优的话大家都不是最优也有问题的。不能小看这个小峰的。你会发现目标mRNA丰度高的样品小峰相对会比较低,对那些丰度低的样品非特异扩增和引物二聚体的峰会更明显。
我建议你多设计几对引物,选一对最好的做实验。
12楼2013-01-23 14:36:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shiliyusly

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-23 14:36:33
不知道你怎样得到这种想法的。在我看来,如果扩增出来的产物不单一的引物不能用做定量。因为定量的时候测的是荧光。如果除了目的产物之外有其它东西也会发出荧光,读出的CT是不准确的。
你说如果不是最优的话大家 ...

我这个是听仪器技术支持说的。那只能重新设计引物了。非常感谢你!
13楼2013-01-23 19:41:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhlf1989513

金虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by shiliyusly at 2013-01-23 11:09:54
谢谢!有些引物二聚体是不是可以忽略呢?40多个循环...

肯定不能忽略啊。。。会影响Ct值的。。到时候计算出的结果就不太可靠了。。。重新设计引物吧。。。
keepon
14楼2013-01-23 21:10:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 shiliyusly 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 301求调剂 +6 yy要上岸呀 2026-03-17 6/300 2026-03-17 23:58 by 星空星月
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业(081702)315分求调剂 +7 yangfz 2026-03-17 7/350 2026-03-17 23:57 by 星空星月
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[考研] 材料,纺织,生物(0856、0710),化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 7/350 2026-03-17 20:20 by 花125533
[考研] 293求调剂 +7 zjl的号 2026-03-16 12/600 2026-03-17 18:22 by 重科小霸王
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林,给自己招师弟中~ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[考研] 302求调剂 +4 小贾同学123 2026-03-15 8/400 2026-03-17 10:33 by 小贾同学123
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 0703化学调剂,求各位老师收留 +8 秋有木北 2026-03-14 8/400 2026-03-16 15:21 by 哦哦123
[考研] 一志愿华中师范071000,325求调剂 +6 RuitingC 2026-03-12 6/300 2026-03-16 14:50 by 可淡不可忘
[考研] 080500,材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 5/250 2026-03-14 16:30 by JourneyLucky
[考研] 材料080500调剂求收留 +3 一颗meteor 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:54 by peike
[考研] 求调剂(材料与化工327) +4 爱吃香菜啦 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:11 by JourneyLucky
[考研] 工科,求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
信息提示
请填处理意见