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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 原生质体融合检测问题
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zhuqinjian

金虫 (小有名气)

[求助] 原生质体融合检测问题

我在做细菌（谷氨酸棒杆菌）原生质体融合高产缬氨酸实验，出发菌株是相同属的两个不同种，进行原生质体灭活，融合后，在再生培养基上长出的菌落，我怎么判断再生的菌落有没有进行同源重组（菌株没有marker）？不同种的原生质体融合后，DNA重组后形成几条DNA链，还是一条吗？各位虫友有木有简单高效筛选缬氨酸方法？在此拜谢了
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坚定方向，坚持下去
1楼 2013-01-22 17:04:45
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necilyx

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhuqinjian: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-01-23 16:16:04
楼主可以尝试这样，原生质体的两个亲本进行不同方式的灭活，比如亲本A进行紫外灭核酸活性，亲本B进行进行热处理灭蛋白活性，这样灭活后的两亲本只有融合到一起的才是能够生长的微生物，而同源之间不会生长，而筛选的话粗筛可以同推理选育的方法，具体做法网上有不少文章，楼主可以查一查。
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聪明才智要为意外做准备~~
3楼2013-01-23 15:57:38
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wyg888

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhuqinjian: 金币+1, ★有帮助 2013-01-23 13:57:28
我也想问这个问题，有哪位大侠知道
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每天都有一个新的开始！
2楼2013-01-23 09:24:24
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zhuqinjian

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by necilyx at 2013-01-23 15:57:38
楼主可以尝试这样，原生质体的两个亲本进行不同方式的灭活，比如亲本A进行紫外灭核酸活性，亲本B进行进行热处理灭蛋白活性，这样灭活后的两亲本只有融合到一起的才是能够生长的微生物，而同源之间不会生长，而筛选的 ...

原理我懂了，那融合后的菌株有几条DNA啊？二者进行同源重组后只剩下一条了，还是变成双倍体啊？
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坚定方向，坚持下去
4楼2013-01-23 16:15:51
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1921952610

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zhuqinjian: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-02-08 11:44:48
是双倍体。检出融合体的方法可以用生长圈法。将一株营养缺陷型突变株（缺缬氨酸的菌株），涂布在基本培养基上，在将融合的菌悬液涂布上去。能长出的为融合成功的。再划线分离即可。
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5楼2013-02-07 15:10:18
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