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wangzhe163金虫 (小有名气)
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[求助]
荧光定量PCR扩增效率低
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哪位高人在做相对荧光定量PCR？我最近在做标准曲线的时候遇到麻烦了，还请高人指点迷津啊。 在绘制标准曲线的时候，标准品是重组质粒，按10倍倍比稀释，取六个稀释度做标准线，R方能在0.99以上，但是扩增效率一直徘徊在55%-75%之间。  ，看网上说的解决办法：增加引物浓度，降低退火温度，改用三步法，（质粒线性化，我连的T-simple，这个载体上面应该有一个ECORV的酶切位点，但是我就是切不开 ）。这些方法我都试过了，引物也重新设计了sweat:，用的试剂是宝生物的SYBR，仪器是ABI 7500.小弟已困惑多日，请高人指点，在此谢过！ |
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4楼2013-01-21 11:19:09