24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

wangzhe163

金虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 997
散金: 468
红花: 1
帖子: 79
在线: 44小时
虫号: 1492171
注册: 2011-11-15
性别: GG
专业: 兽医免疫学

[求助] 荧光定量PCR扩增效率低

哪位高人在做相对荧光定量PCR？我最近在做标准曲线的时候遇到麻烦了，还请高人指点迷津啊。
在绘制标准曲线的时候，标准品是重组质粒，按10倍倍比稀释，取六个稀释度做标准线，R方能在0.99以上，但是扩增效率一直徘徊在55%-75%之间。

，看网上说的解决办法：增加引物浓度，降低退火温度，改用三步法，（质粒线性化，我连的T-simple，这个载体上面应该有一个ECORV的酶切位点，但是我就是切不开

）。这些方法我都试过了，引物也重新设计了sweat:，用的试剂是宝生物的SYBR，仪器是ABI 7500.
小弟已困惑多日，请高人指点，在此谢过！

回复此楼

» 猜你喜欢

AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点已经有0人回复
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有50人回复
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？已经有0人回复
His标签蛋白纯化怎么才能快？已经有0人回复
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析已经有0人回复
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用已经有0人回复
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点已经有0人回复
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用已经有0人回复
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点已经有0人回复
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？已经有0人回复

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

拼搏定能成功

1楼 2013-01-21 10:14:34

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

wangzhe163

金虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 997
散金: 468
红花: 1
帖子: 79
在线: 44小时
虫号: 1492171
注册: 2011-11-15
性别: GG
专业: 兽医免疫学

引用回帖:

9楼: Originally posted by yinchang at 2013-01-22 10:37:55
建议你用hindIII切一下线性化质粒，部分材料上说质粒的形态会影响扩增的效率。另外，今年AEM今年有篇文章专门讨论定量扩增效率的，建议你看一下，我阅读的结论是只要有合适的分析方法，没有必要过分纠结于扩增效率， ...

要求是内参的扩增效率和待测的扩增效率是一直的，要么都低，要么都高，现在是待测因子的扩增效率高，内参的扩增效率低。在simple T 上有hindIII这个酶切位点吗，在map上没找到啊。
顺便问一下，在检测的时候，溶解曲线出现杂峰会对实验结果造成多大的影响？