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tmdabc

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
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8楼: Originally posted by runying36 at 2013-01-19 19:44:14
首先LZ考虑一下，你这样急急忙忙地做的结果是不是符合逻辑，都没有内参，我想你投的期刊能接受这样的结果吗？
下面我提供的是关于ΔΔCt方法分析的统计表示，这并不代表我认同LZ可以用这个方法统计出你所需要的图。 ...

谢谢。
内参应该都是0啊，因为处理过的样品里面不可能有GAPDH、actin什么的！
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11楼2013-01-19 20:14:03
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tmdabc

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by runying36 at 2013-01-19 19:46:21
这幅图不能直接贴在这里，所以请LZ下载一下哈

where？
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12楼2013-01-19 20:14:26
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tmdabc

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
10楼: Originally posted by runying36 at 2013-01-19 19:59:28
哎呀，有个三线表格就是贴不上来，也传不上来(传了没法插入链接)
反正就是你用处理组的三个数字分别相又得每组的三个数字，然后用这三个数字去照常统计分析即可。表示方法可以直接记为ΔΔCt的mean加减SEM，也可以 ...

看不懂啊。
详细点清楚点行么？谢谢
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13楼2013-01-19 20:15:05
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Lester11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
找一些文献琢磨一下吧，这样理解的更好
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Followyourheart!
14楼2013-01-20 00:05:38
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tmdabc

金虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by Lester11 at 2013-01-20 00:05:38
找一些文献琢磨一下吧，这样理解的更好

无解啊
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15楼2013-01-20 00:29:49
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 你的回帖内容很有质量，鼓励应助！ 2013-01-20 19:22:11
看到这个才发现没有内参的表达，所以你做的是绝对定量，不能用2^(-△△Ct)，而是2^(-△Ct)。绝对定量时对样品反转录时RNA量的控制要求很严格。而且需要同一次反转录的样品来做定量。
至于内参，不一定是GAPDH，只是这个基因常用。你根据需要可以选取其它的基因，只要是表达稳定的基因就可以了。
此外，你这样的数据是一次处理的三个technical repeat，不是biological repeat，不具备显著性分析的可能。理论上做误差也是应该用biological repeats之间的，你实在不行把这三个tehnical repeats的SD放上去，不过我认为是不合适的。
至于作图，大家也给你分析了，Y轴就是表达量了，X轴是不同的样品。
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16楼2013-01-20 01:44:01
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tmdabc

金虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-20 01:44:01
看到这个才发现没有内参的表达，所以你做的是绝对定量，不能用2^(-△△Ct)，而是2^(-△Ct)。绝对定量时对样品反转录时RNA量的控制要求很严格。而且需要同一次反转录的样品来做定量。
至于内参，不一定是GAPDH，只是 ...

首先，
收样后，DNA酶处理了，然后把包装的病毒DNA提出来，做定量。
也就是说，不可能有参照基因，也就是可以直接用代替。
其次，
我说的很清楚，那么多问题，居然都没人回答对号一个呢，
CT值和2^(-△△Ct)说明的问题不一样，你们就不能告诉我怎么办么？
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17楼2013-01-20 04:07:48
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
17楼: Originally posted by tmdabc at 2013-01-20 04:07:48
首先，
收样后，DNA酶处理了，然后把包装的病毒DNA提出来，做定量。
也就是说，不可能有参照基因，也就是可以直接用代替。
其次，
我说的很清楚，那么多问题，居然都没人回答对号一个呢，
CT值和2^(-△△Ct)说 ...

这样的话就做绝对定量也是可以的。2^(-Ct)就相当于表达量了。如果更严格的话，可以做一个CT与拷贝数的关系的曲线，把结果换算成DNA拷贝数。如果想看药物效果的话，用2^(-△Ct)计算，就是处理与未处理的表达变化。
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18楼2013-01-20 04:50:07
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tmdabc

金虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-20 04:50:07
这样的话就做绝对定量也是可以的。2^(-Ct)就相当于表达量了。如果更严格的话，可以做一个CT与拷贝数的关系的曲线，把结果换算成DNA拷贝数。如果想看药物效果的话，用2^(-△Ct)计算，就是处理与未处理的表达变化。...

2^(-Ct)的结果和预想的不符合啊，
CT值是符合的，但是第三个数据所得delta t＜1，其他两个处理都大于1，导致，delta delta t，第三个成为最大的了。
怎么办？
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19楼2013-01-20 05:57:09
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
19楼: Originally posted by tmdabc at 2013-01-20 05:57:09
2^(-Ct)的结果和预想的不符合啊，
CT值是符合的，但是第三个数据所得delta t＜1，其他两个处理都大于1，导致，delta delta t，第三个成为最大的了。
怎么办？...

这是因为你只测了一次的缘故。只能说第三个数据和前面两个的趋势不一样。如果有重复多次应该能排除是样品的问题还是操作上的问题。
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20楼2013-01-20 06:30:04
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