24小时热门版块排行榜    

查看: 7482  |  回复: 26

tmdabc

金虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by runying36 at 2013-01-19 19:44:14
首先LZ考虑一下,你这样急急忙忙地做的结果是不是符合逻辑,都没有内参,我想你投的期刊能接受这样的结果吗?
下面我提供的是关于ΔΔCt方法分析的统计表示,这并不代表我认同LZ可以用这个方法统计出你所需要的图。 ...

谢谢。
内参应该都是0啊,因为处理过的样品里面不可能有GAPDH、actin什么的!
11楼2013-01-19 20:14:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tmdabc

金虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by runying36 at 2013-01-19 19:46:21
这幅图不能直接贴在这里,所以请LZ下载一下哈

where?
12楼2013-01-19 20:14:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tmdabc

金虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
10楼: Originally posted by runying36 at 2013-01-19 19:59:28
哎呀,有个三线表格就是贴不上来,也传不上来(传了没法插入链接)
反正就是你用处理组的三个数字分别相又得每组的三个数字,然后用这三个数字去照常统计分析即可。表示方法可以直接记为ΔΔCt的mean加减SEM,也可以 ...

看不懂啊。
详细点清楚点行么?谢谢
13楼2013-01-19 20:15:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Lester11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
找一些文献琢磨一下吧,这样理解的更好
Followyourheart!
14楼2013-01-20 00:05:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tmdabc

金虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by Lester11 at 2013-01-20 00:05:38
找一些文献琢磨一下吧,这样理解的更好

无解啊
15楼2013-01-20 00:29:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 你的回帖内容很有质量,鼓励应助! 2013-01-20 19:22:11
看到这个才发现没有内参的表达,所以你做的是绝对定量,不能用2^(-△△Ct),而是2^(-△Ct)。绝对定量时对样品反转录时RNA量的控制要求很严格。而且需要同一次反转录的样品来做定量。
至于内参,不一定是GAPDH,只是这个基因常用。你根据需要可以选取其它的基因,只要是表达稳定的基因就可以了。
此外,你这样的数据是一次处理的三个technical repeat,不是biological repeat,不具备显著性分析的可能。理论上做误差也是应该用biological repeats之间的,你实在不行把这三个tehnical repeats的SD放上去,不过我认为是不合适的。
至于作图,大家也给你分析了,Y轴就是表达量了,X轴是不同的样品。
16楼2013-01-20 01:44:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tmdabc

金虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-20 01:44:01
看到这个才发现没有内参的表达,所以你做的是绝对定量,不能用2^(-△△Ct),而是2^(-△Ct)。绝对定量时对样品反转录时RNA量的控制要求很严格。而且需要同一次反转录的样品来做定量。
至于内参,不一定是GAPDH,只是 ...

首先,
收样后,DNA酶处理了,然后把包装的病毒DNA提出来,做定量。
也就是说,不可能有参照基因,也就是可以直接用代替。
其次,
我说的很清楚,那么多问题,居然都没人回答对号一个呢,
CT值和2^(-△△Ct)说明的问题不一样,你们就不能告诉我怎么办么?
17楼2013-01-20 04:07:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
17楼: Originally posted by tmdabc at 2013-01-20 04:07:48
首先,
收样后,DNA酶处理了,然后把包装的病毒DNA提出来,做定量。
也就是说,不可能有参照基因,也就是可以直接用代替。
其次,
我说的很清楚,那么多问题,居然都没人回答对号一个呢,
CT值和2^(-△△Ct)说 ...

这样的话就做绝对定量也是可以的。2^(-Ct)就相当于表达量了。如果更严格的话,可以做一个CT与拷贝数的关系的曲线,把结果换算成DNA拷贝数。如果想看药物效果的话,用2^(-△Ct)计算,就是处理与未处理的表达变化。
18楼2013-01-20 04:50:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tmdabc

金虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-20 04:50:07
这样的话就做绝对定量也是可以的。2^(-Ct)就相当于表达量了。如果更严格的话,可以做一个CT与拷贝数的关系的曲线,把结果换算成DNA拷贝数。如果想看药物效果的话,用2^(-△Ct)计算,就是处理与未处理的表达变化。...

2^(-Ct)的结果和预想的不符合啊,
CT值是符合的,但是第三个数据所得delta t<1,其他两个处理都大于1,导致,delta delta t,第三个成为最大的了。
怎么办?
19楼2013-01-20 05:57:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
19楼: Originally posted by tmdabc at 2013-01-20 05:57:09
2^(-Ct)的结果和预想的不符合啊,
CT值是符合的,但是第三个数据所得delta t<1,其他两个处理都大于1,导致,delta delta t,第三个成为最大的了。
怎么办?...

这是因为你只测了一次的缘故。只能说第三个数据和前面两个的趋势不一样。如果有重复多次应该能排除是样品的问题还是操作上的问题。
20楼2013-01-20 06:30:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tmdabc 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 环境领域全国重点实验室招收博士1-2名 +3 QGZDSYS 2026-03-13 3/150 2026-03-18 00:13 by PY-Hzb
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业(081702)315分求调剂 +7 yangfz 2026-03-17 7/350 2026-03-17 23:57 by 星空星月
[考研] 302求调剂 +6 呼呼呼。。。。 2026-03-17 6/300 2026-03-17 23:56 by 星空星月
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[考研] 293求调剂 +7 zjl的号 2026-03-16 12/600 2026-03-17 18:22 by 重科小霸王
[考研] 一志愿苏州大学材料工程(085601)专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +4 梨花珞晚风 2026-03-17 4/200 2026-03-17 13:38 by houyaoxu
[考研] 211本,11408一志愿中科院277分,曾在中科院自动化所实习 +6 Losir 2026-03-12 7/350 2026-03-17 12:09 by danranxie
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +6 薛云鹏 2026-03-15 6/300 2026-03-17 11:05 by 学员h26Tkc
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 11408 一志愿西电,277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 材料与化工一志愿南昌大学327求调剂推荐 +7 Ncdx123456 2026-03-13 8/400 2026-03-16 12:15 by karry wen
[考研] 255求调剂 +3 李嘉慧, 2026-03-12 4/200 2026-03-14 16:58 by 有只狸奴
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 5/250 2026-03-14 16:30 by JourneyLucky
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 0856材料与化工301求调剂 +5 奕束光 2026-03-13 5/250 2026-03-13 22:00 by 星空星月
[考研] 一志愿西南交大,材料专硕317求调剂 +5 lx8568 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:43 by peike
[考研] 四川大学085601材料工程专硕 初试294求调剂 +4 祝我们好在冬天 2026-03-11 4/200 2026-03-13 21:39 by peike
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
信息提示
请填处理意见