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ying_cheng金虫 (小有名气)
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[求助]
液相色谱分析氨基酸的衍生方法 已有3人参与
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查过一些文献，有用OPA、DNFB、FITC、FMOC等等衍生的，可是每种方法似乎都有其优劣，比如OPA衍生产物不稳定，要尽快进行检测；DNFB的衍生产物稳定，但是毒性很大；FITC用的人也挺多的，但是干扰因素多，还要有真空蒸发装置；不知道文献调研的对不对，在这里请教各位做过类似实验的前辈们，请你们来评价一下吧，顺便给点建议，如果直接有分析方法那当然最好啦……谢啦…… 实验室只有PDA的检测器，没有荧光的，请教一下各位大侠，用哪种衍生试剂产物更稳定、更适合用紫外检测器？ |
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3楼2013-01-18 10:39:44
【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
xbqewpq: 金币+3, 感谢应助，欢迎常来分析版交流~ 2013-01-18 10:44:02
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xbqewpq: 金币+3, 感谢应助，欢迎常来分析版交流~ 2013-01-18 10:44:02
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首先声明本人不是替Waters公司做广告，是用过他们家的这个产品！ 建议楼主采用Waters的AccQ-Tag柱前衍生化法，这个方法可以用紫外检测器，衍生化反应快速，衍生化得到的产物是很稳定的，室温放置2到3天都没有问题的。 另外，Waters公司有一个AccQ-Tag的氨基酸分析包，提供下列测试所需要的实验必需品： 1. 色谱柱 2. 17种水解氨基酸的对照品 3. 衍生化反应所需的：衍生化试剂、稀释剂、缓冲液 4. HPLC测试用的浓缩流动相，使用时用水稀释即可（该流动相的配比在USP通则1052中有描述，但是强烈建议购买，自己配制的效果没有商品化销售的好） 5. 一套完整的色谱分析方法，如果楼主拥有Waters的HPLC，根据不同的仪器型号直接用使用手册中的色谱条件（梯度洗脱程序），Waters公司确保该方法可以在Waters的HPLC上运行，客户购买整套分析包、并且使用Waters仪器，如果无法重复该方法Waters可以提供一次免费的现场解决问题。 当然，用安捷伦的HPLC也是能够达到预期的分离效果，但是需要根据仪器的性能调整一下梯度洗脱程序。 另外，建议楼主看一下USP通则1052，该通则中有氨基酸分析的水解方法、验证、定量计算、衍生化方法等内容可供参考，Waters的AccQ-Tag方法也被收载，规定用荧光检测器（主要是过量的衍生化试剂副产物的峰，在荧光检测器下的响应很小，有利于氨基酸的分离）。 希望对你有帮助！ |
2楼2013-01-17 22:12:17
ying_cheng
金虫 (小有名气)
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4楼2013-01-18 12:00:28
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5楼2013-01-19 08:40:46
50