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晏育伟

铜虫 (初入文坛)


[求助] 3’RACE 已有1人参与

最近在做3‘RACE,根据一段cDNA片段,设计两条特异性引物(GSP1和GSP2,巢式引物),用的是Takara的试剂盒。第一轮PCR后电泳什么条带都没有,包括Control也没有条带,但是用巢式引物跑第二轮时能跑出两条带。请问各位,这是什么原因呢?为什么第一次没有带,第二次就有了了???谢谢啦!!!!
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XOooZzz

银虫 (小有名气)

正常。切胶回收。检测一下是不是单引物扩增。赶快测序看看。

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2楼2013-01-15 09:15:57
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晏育伟

铜虫 (初入文坛)


送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by XOooZzz at 2013-01-15 09:15:57
正常。切胶回收。检测一下是不是单引物扩增。赶快测序看看。

好的,谢谢啦!我后来想了下,应该是我第一次PCR跑的循环次数太少了(20次),第二次用PCR产物跑的,循环次数为30次,所以能跑出条带。
3楼2013-01-15 15:33:16
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lvying11140581

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1楼说的很对,做3‘race经常有单引物扩增产物,所以每次都要做一个单引物扩增对照,祝成功
淡泊名利
4楼2013-01-17 08:15:48
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生物里小可爱

新虫 (初入文坛)

想问巢式pcr引物是怎么设计的

发自小木虫Android客户端
5楼2018-07-06 00:54:02
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

RACE就是这样的,因为相对于传统以DNA为模板的PCR来说,RACE实验特异性没那么高,第一轮PCR后,会有好多的扩增,所以采用巢式PCR来提高特异性,有的时候需要进行三轮才出来高特异性条带,而有的一轮就出来特异性条带了
6楼2018-07-06 08:37:13
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