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晏育伟

铜虫 (初入文坛)

[求助] 3’RACE 已有1人参与

最近在做3‘RACE，根据一段cDNA片段，设计两条特异性引物（GSP1和GSP2，巢式引物），用的是Takara的试剂盒。第一轮PCR后电泳什么条带都没有，包括Control也没有条带，但是用巢式引物跑第二轮时能跑出两条带。请问各位，这是什么原因呢？为什么第一次没有带，第二次就有了了？？？谢谢啦！！！！
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    • 2013-01-14 22:15:47, 1.25 M

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1楼 2013-01-14 22:16:34
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XOooZzz

银虫 (小有名气)
正常。切胶回收。检测一下是不是单引物扩增。赶快测序看看。
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晏育伟
2楼2013-01-15 09:15:57
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晏育伟

铜虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by XOooZzz at 2013-01-15 09:15:57
正常。切胶回收。检测一下是不是单引物扩增。赶快测序看看。

好的，谢谢啦！我后来想了下，应该是我第一次PCR跑的循环次数太少了（20次），第二次用PCR产物跑的，循环次数为30次，所以能跑出条带。
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3楼2013-01-15 15:33:16
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lvying11140581

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1楼说的很对，做3‘race经常有单引物扩增产物，所以每次都要做一个单引物扩增对照，祝成功
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淡泊名利
4楼2013-01-17 08:15:48
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生物里小可爱

新虫 (初入文坛)
想问巢式pcr引物是怎么设计的

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5楼2018-07-06 00:54:02
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

RACE就是这样的，因为相对于传统以DNA为模板的PCR来说，RACE实验特异性没那么高，第一轮PCR后，会有好多的扩增，所以采用巢式PCR来提高特异性，有的时候需要进行三轮才出来高特异性条带，而有的一轮就出来特异性条带了
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6楼2018-07-06 08:37:13
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