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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 关于菌种保存
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bradyluo

新虫 (小有名气)

[求助] 关于菌种保存

最近筛出一批菌体，要放假了想要保存！
但是用的甘油灭菌后用枪吸不上来，特别绸，而且之前用甘油保存过得菌体再放到培养基里面活化的时候，活化不出来，是不是有什么问题啊?
求各位大神指教！！
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1楼 2013-01-14 13:55:25
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cqlsf

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-01-14 15:40:45
楼主  甘油和生理盐水1:3   灭菌用
或者甘油+ 2x生理盐水灭菌， 再1:1和菌液混合
生理盐水也可用0.1M PBS   祝顺利
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老顽虫是大酱油滴：知新，行知，业精于勤。。。木虫的闺蜜叫木马。。
2楼2013-01-14 14:16:46
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oldflying

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-01-14 15:40:59
bradyluo: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-01-14 16:09:15
由于纯甘油十分粘稠，很难定量，一般配成终浓度 50% 的水溶液，高压灭菌后室温保存即可。使用时按 50% 甘油:菌液 = 1:1 混合均匀，然后迅速冷冻（可以用液氮）。
保存后活化不出菌种，可能是甘油浓度不够，造成菌种死亡，常用的是终浓度 10-30% 的甘油，多数用20%左右。
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一个人的努力和坚持！
3楼2013-01-14 15:24:39
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2013-01-19 21:26:56
灭菌的甘油一般配成50%或者75%的，100%的甘油是过于黏稠不好吸。和菌液混合至甘油终浓度为15%，-80°C冰箱冻存。
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4楼2013-01-14 15:24:45
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bradyluo

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by oldflying at 2013-01-14 15:24:39
由于纯甘油十分粘稠，很难定量，一般配成终浓度 50% 的水溶液，高压灭菌后室温保存即可。使用时按 50% 甘油:菌液 = 1:1 混合均匀，然后迅速冷冻（可以用液氮）。
保存后活化不出菌种，可能是甘油浓度不够，造成菌种 ...

谢谢。。
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5楼2013-01-14 16:09:24
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mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
10~30%甘油。

纯甘油的话把细菌腌咸菜了！
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环境卫生、微生物学、卫生应急
6楼2013-01-15 00:30:14
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独孤绮梦

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+5, 鼓励新虫 2013-01-19 21:27:04
我比较喜欢用高压灭菌的纯甘油，这样保存菌种的时候可以根据不同的需要随时加入到LB或者其它液体培养基中配成保存液。因为纯甘油用蓝枪头很难吸，所以可以把蓝枪头事先用剪刀剪去一小段尖头再灭菌备用就可以啦~~保存菌种通常用20%甘油。注意加入甘油后要混匀，根据菌种不同，可以选择直接放入-80或者先用液氮速冻再放入-80.
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7楼2013-01-15 09:03:48
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wnanfeng

至尊木虫 (小有名气)
直接用甘油保藏，甘油是高渗溶剂，导致菌体失水，导致菌体死亡。保藏用的甘油溶液一般为20%左右，20%指的是终浓度，也就是用斜面保藏，加20%的甘油溶液（或石蜡油），如果液体菌种，只要添加甘油终浓度不要超过20%即可，斜面4℃保藏，液体-18℃没有问题。
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心有多大，舞台就有多大
8楼2013-01-15 10:29:46
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lhwen182

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励应助 2013-01-19 21:27:12
甘油浓度太高了吧    甘油配成30%或50%，按比例加菌液，终浓度在15%左右就可以了
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9楼2013-01-15 12:12:33
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丽羽寒梅

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
zhang8826857: 金币+5, 鼓励新虫 2013-01-19 21:27:19
菌种的保存要用的甘油浓度应为40%，并置于-20度的冰箱中保存即可！
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能认识你们是我的荣幸！
10楼2013-01-19 12:26:25
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