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测定总氮
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| 请问各位是怎么测定发酵液中的总氮的？用的滤液还是发酵液？如果用滤液测定总氮的话，只能测定出溶液的氮（包括无机氮和有机氮）；若以测定发酵液，用凯氏定氮方法测定的话，则会测定出菌体中的氮，结果也不准确（经过测定，在整个发酵过程中以这种方法测定，总氮量几乎不变）。请问要想测出菌体对于总氮的利用情况要怎么测定？ |
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【答案】应助回帖
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amisking: 金币+5, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-01-12 19:02:56
wwdxx2004: 金币+1 2013-01-14 08:27:33
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α-氨基氮测定试剂的配制及测定方法 一、测定试剂的制备 A、测定试剂A的配制，拟定配制1000ml。 将0.671gOPA（邻苯二甲醛）溶解于100ml95%的乙醇。 将3.837gNaOH，8.468g硼酸，0.816gNAC（N-乙酰半胱氨酸）用800ml去离子水溶解，并将含OPA的100ml乙醇溶液与之混合后定容到1000ml。 B、测定试剂B的配制，拟定配制1000ml。 将3.837gNaOH，8.468g硼酸，0.816gNAC（N-乙酰半胱氨酸）用800ml去离子水溶解后与100ml95%的乙醇混合，并用去离子水定容到1000ml。 以上溶液可以放在4摄氏度下存放两周。样品液中氨基N的浓度应该稀释到250mg/L的范围内，以确保测得数据的准确性。 二、样品液的制备 1．空白样，将50ul水加入洁净的15ml离心管中，加入3ml的A液用作为零点。 2．样品，将50ul样品液加入洁净的离心管，加入3mlA液混匀，10分钟后测其在335nm下的吸光值。 3．样品空白，取50ul的样品液加入洁净的离心管，加入3mlB液混匀10分钟后测量其335nm下的吸光值。 三、标准曲线的制作 配制10mM的异亮氨酸的标准溶液（0.328g异亮氨酸用去离子水溶解并定容到250ml）。 基本氨基酸态氮的标准曲线和计算 Tube blank 1 2 3 4 5 10 mM ile (µL) 0 10 20 30 40 50 去离子水 (µL) 50 40 30 20 10 0 OPA reagent (µL) 3000 3000 3000 3000 3000 3000 Absorbance 335nm Nitrogen (mg/L) 0 28 56 84 112 140 A（净）=A（样品）-A（样品空白） 四、计算 样品中氨基N的浓度： Nitrogen (mg/L)= (Absorbance * Slope + Intercept) * Dilution Factor 这是我们实验室发酵过程中测氮的方法，仅供参考 |
2楼2013-01-12 16:08:32
3楼2013-01-12 16:16:17
wgy2007
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4楼2013-01-13 10:30:27
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yuyuwuxin
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