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wwdxx2004

金虫 (正式写手)

[求助] 测定总氮

请问各位是怎么测定发酵液中的总氮的?用的滤液还是发酵液?如果用滤液测定总氮的话,只能测定出溶液的氮(包括无机氮和有机氮);若以测定发酵液,用凯氏定氮方法测定的话,则会测定出菌体中的氮,结果也不准确(经过测定,在整个发酵过程中以这种方法测定,总氮量几乎不变)。请问要想测出菌体对于总氮的利用情况要怎么测定?
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yuyuwuxin

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by satisfyme at 2013-01-17 15:46:58
我用国标碱性过硫酸钾法测定时,都是可溶性氮,为什么测出的数据基本没有变化呢...

数据没有变化,是什么意思?你测得OD220一般多大?
9楼2013-01-18 12:43:31
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tpFlexin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+5, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-01-12 19:02:56
wwdxx2004: 金币+1 2013-01-14 08:27:33
α-氨基氮测定试剂的配制及测定方法
一、测定试剂的制备
A、测定试剂A的配制,拟定配制1000ml。
将0.671gOPA(邻苯二甲醛)溶解于100ml95%的乙醇。
将3.837gNaOH,8.468g硼酸,0.816gNAC(N-乙酰半胱氨酸)用800ml去离子水溶解,并将含OPA的100ml乙醇溶液与之混合后定容到1000ml。
B、测定试剂B的配制,拟定配制1000ml。
将3.837gNaOH,8.468g硼酸,0.816gNAC(N-乙酰半胱氨酸)用800ml去离子水溶解后与100ml95%的乙醇混合,并用去离子水定容到1000ml。
        以上溶液可以放在4摄氏度下存放两周。样品液中氨基N的浓度应该稀释到250mg/L的范围内,以确保测得数据的准确性。
二、样品液的制备
1.空白样,将50ul水加入洁净的15ml离心管中,加入3ml的A液用作为零点。
2.样品,将50ul样品液加入洁净的离心管,加入3mlA液混匀,10分钟后测其在335nm下的吸光值。
3.样品空白,取50ul的样品液加入洁净的离心管,加入3mlB液混匀10分钟后测量其335nm下的吸光值。
三、标准曲线的制作
配制10mM的异亮氨酸的标准溶液(0.328g异亮氨酸用去离子水溶解并定容到250ml)。
基本氨基酸态氮的标准曲线和计算

Tube        blank        1        2        3        4        5
10 mM ile (µL)        0        10        20        30        40        50
去离子水 (µL)        50        40        30        20        10        0
OPA reagent (µL)        3000        3000        3000        3000        3000        3000
Absorbance 335nm                                               
Nitrogen (mg/L)        0        28        56        84        112        140
       
        A(净)=A(样品)-A(样品空白)
四、计算
样品中氨基N的浓度:
       Nitrogen (mg/L)= (Absorbance * Slope + Intercept) * Dilution Factor

这是我们实验室发酵过程中测氮的方法,仅供参考
2楼2013-01-12 16:08:32
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tpFlexin

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by tpFlexin at 2013-01-12 16:08:32
α-氨基氮测定试剂的配制及测定方法
一、测定试剂的制备
A、测定试剂A的配制,拟定配制1000ml。
将0.671gOPA(邻苯二甲醛)溶解于100ml95%的乙醇。
将3.837gNaOH,8.468g硼酸,0.816gNAC(N-乙酰半胱氨酸)用80 ...

补充下,我们测的是有机N,主要是氨基酸的消耗,取的是发酵液离心后的上清
3楼2013-01-12 16:16:17
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wgy2007

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wwdxx2004: 金币+1 2013-01-14 08:27:41
wwdxx2004: 金币+1 2013-02-20 12:50:28
用凯氏定氮法测离心后清液的总氮
4楼2013-01-13 10:30:27
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