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cai3110274木虫 (职业作家)
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[求助]
real-time PCR求助
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最近做real-time PCR，遇到一些问题 ，希望会的虫友帮忙解答一下 1. 标准曲线的R2大于0.999，但是曲线斜率偏小，扩增效率大于100%， 融解曲线情况良好 没有引物二聚体，这是为什么呢 ？ 2. 还有就是在阴性对照中也会出现扩增，但都在CT大于35（目的片段CT在15~25之间），是不是因为这个扩增导致了 扩增效率的增大？该怎么去除呢？ 3. 我看到有人说扩增效率在 90~110之间都可以接受，阴性对照在35循环后出现扩增可以忽略不计，不知道有什么参考文献可以给出吗？ 希望知道的虫友可以不吝赐教，非常感谢！ |
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小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2013-01-15 13:52:41
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| 可能你的循环数有点多了 退火时间可以适当降低 |
cai311027415楼2013-01-14 16:07:35
cai3110274
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