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天使1Q86之城

新虫 (初入文坛)

[求助] 酶切连接

第一步:从测序成功的质粒上酶切出目的基因,凝胶回收。
第二步:把质粒35S-GFP-1300酶切出同样的酶切位点,凝胶回收。
第三部:用高效连接酶连接后转化DH5a
结果:转化效率很高,但是没有阳性克隆。
正常来说只要是阳性克隆就应该没有问题的,但是···为什么总是不对呢?
最近做的甚是苦逼,诸位大侠帮帮小弟吧。
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honey倩

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 天使1Q86之城 at 2013-01-09 20:38:45
我用的Fermetas快速内切酶,一般四十分钟酶切就很充分了,切质粒用了3个小时。...

我们实验室也是Fermentas的酶,但是还是用的传统的酶,快酶不咋好用呢…
当你的眼泪忍不住要流出来的时候,睁大眼睛,千万别眨眼,你会看到世界由清晰到模糊的全过程~~
9楼2013-01-10 15:28:55
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