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hubohuna

新虫 (初入文坛)

[求助] 坛子里有做水稻的吗?问下水稻克隆方面的经验。

以前没做过水稻,最近在分段连一个5k的启动子,前面3k已经连上去了,后面2k怎么也连不上,不知道什么原因,用的方法是沉淀的方法,没有切胶,不知道是不是水稻基因组本身的原因?
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hubohuna

新虫 (初入文坛)

2楼2013-01-09 16:46:04
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hubohuna

新虫 (初入文坛)

老是连不上都快崩溃了,水稻克隆和拟南芥克隆有什么区别吗?
3楼2013-01-09 19:58:47
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hubohuna

新虫 (初入文坛)

求指教a
4楼2013-01-10 12:01:42
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你这个问题本身就是分子克隆的问题,跟水稻没有关系
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2013-01-10 14:24:09
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hubohuna

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by gyesang at 2013-01-10 14:24:09
你这个问题本身就是分子克隆的问题,跟水稻没有关系

你们实验室水稻克隆和拟南芥是一套体系吗?
6楼2013-01-10 16:42:26
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hubohuna

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by gyesang at 2013-01-10 14:24:09
你这个问题本身就是分子克隆的问题,跟水稻没有关系

或者说有什么类似于水稻基因组快速克隆之列的protocol吗?
7楼2013-01-10 16:43:57
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yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
反复检查一下前面的3K吧,确认前面连上的完全正确,再进行下一步工作。
8楼2013-01-11 14:28:19
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XOooZzz

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
基因克隆,水稻和拟南芥没区别
你的片段是先克隆到T载体再拼接起来的?已经连上的3K和后面的2K有没有测序验证?你用的都是什么连接方法?传统酶切?topo?A-T?GoldenGate?Gateway?
lz请尽量多地提供信息,别人才能给你分析。
9楼2013-01-11 16:20:42
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