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Nancy0717

新虫 (初入文坛)

[求助] 小鼠巨噬细胞的分离培养

哪位大侠有分离小鼠巨噬细胞的经验呢，我想分离后用LPS刺激细胞增值，试问分离细胞后要怎样诱导成成熟的巨噬细胞呢？需要诱导几天呢？谢谢各位了
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1楼2013-01-08 22:08:22
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zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
以前我做的话是几个小时，如果时间长了，LPS毒性会有影响。不知你的结果如何？
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shine
2楼2013-01-09 12:55:04
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nlbtr

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是悬浮细胞么？悬浮的试试这个：http://www.genloci.com/goods.php?id=1280
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3楼2013-01-09 13:43:08
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Nancy0717

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhang881007 at 2013-01-09 12:55:04
以前我做的话是几个小时，如果时间长了，LPS毒性会有影响。不知你的结果如何？

我分离后是用的L929 condition medium诱导的，诱导成成熟的巨噬细胞后再用LPS和其他的样品处理。但是不清楚用L929 condition medium诱导需要几天才可以成为成熟的巨噬细胞呢。
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4楼2013-01-14 05:02:04
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Nancy0717

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhang881007 at 2013-01-09 12:55:04
以前我做的话是几个小时，如果时间长了，LPS毒性会有影响。不知你的结果如何？

我分离后是用的L929 condition medium诱导的，诱导成成熟的巨噬细胞后再用LPS和其他的样品处理。但是不清楚用L929 condition medium诱导需要几天才可以成为成熟的巨噬细胞呢。
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5楼2013-01-14 05:02:28
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海洋淼淼

新虫 (初入文坛)
弱弱的问一句？lps刺激细胞后是直接在细胞培养液中加入LPS嘛？一般论文上只说明了刺激的浓度但是加入具体的体积却没有告诉？有没有哪位大侠有类似比如说6孔板加入LPS为多少浓度多少体积的参考指标呢？
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6楼2013-04-08 19:48:19
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hong_yuli

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我不知道你要做的是免疫试验还是什么试验。一般分为几种。单一的取细胞主要是腹腔巨噬细胞。首先将小鼠脱臼处死。在百分之75的酒精浸泡 一下，然后拿到无菌操作台（这一步非常关键，做不好就要污染）。将小鼠开腹，用注射器抽满DMEM，反复清洗。如果要是做免疫的话就将小鼠的脾研磨。多清洗几次，这样细胞能吹下来很多，计数，用培养皿加入完全培养基培养就可以。达到百分之七八十加LPS刺激。关键看你做什么药。
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7楼2013-04-09 00:29:44
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亦木澜

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by hong_yuli at 2013-04-09 00:29:44
我不知道你要做的是免疫试验还是什么试验。一般分为几种。单一的取细胞主要是腹腔巨噬细胞。首先将小鼠脱臼处死。在百分之75的酒精浸泡 一下，然后拿到无菌操作台（这一步非常关键，做不好就要污染）。将小鼠开腹， ...

你好，请教个问题，LPS刺激是必须的嘛？做体外吞噬实验得用成熟的巨噬细胞？
还有个问题，小鼠开腹后，用DMEM清洗腹腔？一只鼠能洗出多少巨噬细胞？多不？
谢谢！
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8楼2013-06-19 22:42:12
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