| 查看: 1653 | 回复: 8 | ||
jmren3361铜虫 (正式写手)
|
[求助]
荧光探针
|
|
最近在学习荧光定量PCR，有几个不懂的地方请教大家： TaqMan探针结合到模板上后，由于Taq酶的活性，被切割产生荧光 FRET、Molecular beacon、Scorpion primer结合到模板上后，是不是一直待在模板上？探针与模板的结合会不会影响PCR扩增？探针与模板的结合与PCR扩增是如何同步进行的？ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有108人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
zhang881007
金虫 (小有名气)
- 应助: 168 (高中生)
- 金币: 571.4
- 红花: 6
- 帖子: 236
- 在线: 81.1小时
- 虫号: 1300123
- 注册: 2011-05-19
- 专业: 生物化学
2楼2013-01-08 15:43:20
ccharlien
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 82 (初中生)
- 金币: 2630.1
- 红花: 3
- 帖子: 334
- 在线: 180.3小时
- 虫号: 1168776
- 注册: 2010-12-13
- 性别: GG
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+5, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-01-08 20:52:28
jmren3361: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-23 08:59:28
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+5, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-01-08 20:52:28
jmren3361: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-23 08:59:28
|
1. 探针不是一直待在模板上，在变性的时候也会解链，但由于探针的退火温度高（一般设计的时候会比引物的退火温度高10度以上），在引物还没有退火结合到模板上的时候，探针已经退火和模板结合了，因此探针和模板的结合程度高于引物。 2. 探针与模板的结合会不影响PCR扩增，因为PCR的时候已经有较稳定的探针-模板结合物 3. Taq酶的3'切割活性会在遇到探针-模板结合物的时候切割探针，使PCR继续下去 |
3楼2013-01-08 20:11:06
jmren3361
铜虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1946.8
- 散金: 353
- 帖子: 412
- 在线: 513.1小时
- 虫号: 661410
- 注册: 2008-11-24
- 性别: GG
- 专业: 化学生物学与生物有机化学
4楼2013-01-09 12:51:38
jmren3361
铜虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1946.8
- 散金: 353
- 帖子: 412
- 在线: 513.1小时
- 虫号: 661410
- 注册: 2008-11-24
- 性别: GG
- 专业: 化学生物学与生物有机化学
5楼2013-01-09 12:52:30
hqsinberg
木虫 (著名写手)
清风小木虫
- MolEPI: 3
- 应助: 20 (小学生)
- 金币: 3556.5
- 红花: 9
- 帖子: 2590
- 在线: 647.4小时
- 虫号: 122327
- 注册: 2005-12-04
- 专业: 微生物遗传育种学
6楼2013-01-09 13:04:45
hqsinberg
木虫 (著名写手)
清风小木虫
- MolEPI: 3
- 应助: 20 (小学生)
- 金币: 3556.5
- 红花: 9
- 帖子: 2590
- 在线: 647.4小时
- 虫号: 122327
- 注册: 2005-12-04
- 专业: 微生物遗传育种学
7楼2013-01-09 13:12:29
8楼2013-01-11 10:32:00
hqsinberg
木虫 (著名写手)
清风小木虫
- MolEPI: 3
- 应助: 20 (小学生)
- 金币: 3556.5
- 红花: 9
- 帖子: 2590
- 在线: 647.4小时
- 虫号: 122327
- 注册: 2005-12-04
- 专业: 微生物遗传育种学
【答案】应助回帖
|
为了表达准确我来个外文的原文（麻烦自己翻译，以免别人的产生误解，原版的外文分子生物学，绝对错不了。）SYBR® Green monitors the total amount of double-stranded DNA but cannot dis-tinguish between different sequences. To be sure that the correct target sequence is being amplified a sequence specific fluorescent probe is needed. An example is theTaqMan® probe (Applied Biosystems, Foster City, CA). The TaqMan® probe consistsof two fluorophores linked by a DNA sequence that will hybridize to the middle of the target DNA. Fluorescence resonance energy transfer (FRET) transfers the energy from the short-wavelength fluorophore on one end to the long wavelength fluorophore at the other end. This quenches the short wave emission. During PCR the TaqMan® probe binds to the target sequence after the denaturation step that separates the two DNA strands. As the Taq polymerase extends the primer during the next PCR cycle it will eventually bump into the TaqMan® probe.The Taq poly-merase is not only capable of displacing strands ahead of it but also has a 5‘-nuclease activity that degrades the DNA strand of the probe.This breaks the linkage between the two fluorophores and disrupts the FRET. The short-wavelength fluorophore is now free from quenching and its fluorescence increases. In this case the increase in fluorescence is directly related to the amount of the specific target sequence that has been amplified。 |
9楼2013-01-11 12:43:00