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jmren3361铜虫 (正式写手)
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荧光探针
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最近在学习荧光定量PCR，有几个不懂的地方请教大家： TaqMan探针结合到模板上后，由于Taq酶的活性，被切割产生荧光 FRET、Molecular beacon、Scorpion primer结合到模板上后，是不是一直待在模板上？探针与模板的结合会不会影响PCR扩增？探针与模板的结合与PCR扩增是如何同步进行的？ |
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ccharlien
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【答案】应助回帖
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jmren3361: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-23 08:59:28
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jmren3361: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-23 08:59:28
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1. 探针不是一直待在模板上，在变性的时候也会解链，但由于探针的退火温度高（一般设计的时候会比引物的退火温度高10度以上），在引物还没有退火结合到模板上的时候，探针已经退火和模板结合了，因此探针和模板的结合程度高于引物。 2. 探针与模板的结合会不影响PCR扩增，因为PCR的时候已经有较稳定的探针-模板结合物 3. Taq酶的3'切割活性会在遇到探针-模板结合物的时候切割探针，使PCR继续下去 |
3楼2013-01-08 20:11:06
zhang881007
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2楼2013-01-08 15:43:20
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4楼2013-01-09 12:51:38
jmren3361
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5楼2013-01-09 12:52:30
