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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » WB曝光后，请教下图片出现此问题的原因
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ljapril

新虫 (初入文坛)

[求助] WB曝光后，请教下图片出现此问题的原因

曝光图.png(8.28KB)
http://kuai.xunlei.com/d/LnU4DQJeswD1oOpQdd6?p=130497
如图，上下两个图都是GAPDH的曝光图，同一天做的不同批，但是差别好大啊，像出现这种问题，大概会是什么原因呢？
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1楼 2013-01-07 18:21:10
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nangyingyuan

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-07 20:44:48
ljapril: 金币+2, ★有帮助 2013-01-08 13:29:41
我觉得应该是跑电泳的问题，胶没配好？胶配完之后不要立即使用。
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2楼2013-01-07 20:06:40
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porphybaby

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ljapril: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-01-08 13:29:32
下面的明显要好看得多。

上面的那个 除了胶没跑好之外 也有可能是你转膜没转好

你看看你膜上的marker  是不是 有 扩散 或者是 歪斜 的现象发生？

如果是这样的话 就是 转膜 没转好 你要检查一下 你的 三明治 结构 有没有做坏

有的时候 太松不行 太紧也不行  特别是 有时候夹的时候 可能会造成一些 移位 或者 扭曲

都会让膜转得不好
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3楼2013-01-07 23:01:48
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Lester11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ljapril: 金币+2, ★有帮助 2013-01-08 13:29:49
胶本身跑的不太好，转膜的效果也有差异。
GAPDH的表达相对还是比较稳定的，应该是操作上出现失误。
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Followyourheart!
4楼2013-01-08 08:13:04
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ljapril

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by nangyingyuan at 2013-01-07 20:06:40
我觉得应该是跑电泳的问题，胶没配好？胶配完之后不要立即使用。

一般是分离胶凝固一小时，浓缩胶半小时，然后就开始点样，电泳
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5楼2013-01-08 13:28:16
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ljapril

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by porphybaby at 2013-01-07 23:01:48
下面的明显要好看得多。

上面的那个 除了胶没跑好之外 也有可能是你转膜没转好

你看看你膜上的marker  是不是 有 扩散 或者是 歪斜 的现象发生？

如果是这样的话 就是 转膜 没转好 你要检查一下 你的 三明 ...

滤纸用的多了，会有有影响吗？
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6楼2013-01-08 13:29:13
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porphybaby

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by ljapril at 2013-01-08 13:29:13
滤纸用的多了，会有有影响吗？...

会有影响。

我以前就是 用多了滤纸 然后它把那个胶捏的都可能变形了
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7楼2013-01-08 14:41:31
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genda_cto

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ljapril: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-01-10 18:05:04
上面一个明显是胶没配好，配胶时注意分离胶的水平面要绝对水平光滑，浓缩胶的宽度要一致，浓缩胶的筛孔要拔好。一次性多配几块加湿后放于4度冰箱备用，不要一块一块的配，避免批间差。实在不行就买预制胶吧。
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8楼2013-01-10 13:07:25
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