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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » assay of ribonuclease activity
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浅笑包包

新虫 (小有名气)

[求助] assay of ribonuclease activity

Ten microliters of protein (0.25 mgÆml)1) and 10 ll of saffron leaf total RNA (10 lgÆll)1) were mixed with 100 ll 50 mm MES (pH 6.0) and incubated at 50 C for 30 min. The reaction was stopped by adding 1 ml of ice-cold 4 m LiCl to the mixture, and incubated in ice for 15 min. Insoluble leaf total RNA was removed by centrifugation (10,000 g) for 15 min at 4 C. The supernatant containing soluble leaf total RNA was quantified by UV absorbance at 260 nm in a spectrophotometer (Lan Optics). One unit of enzyme was defined as the amount of protein causing an increase of absorption of 1.0 after 30 min of incubation. The positive and negative controls were RNase A and the heated CsPR10 (100 C for 10 min), respectively.

上述来自文献 请问是什么意思？为什么要把蛋白质与RNA融合？融合后又如何表达出了它的核糖核苷酸活性？
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1楼 2013-01-06 22:02:38
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
浅笑包包: 金币+8, ★★★很有帮助 2013-01-07 14:48:18
ribonuclease是RNA酶，也就是通常我们说的RNase。实验非常简单，是在RNA中加入RNase测定RNase的活性。然后通过测紫外吸收，如果RNA被降解，吸收减小。
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2楼2013-01-07 06:35:38
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浅笑包包

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-07 06:35:38
ribonuclease是RNA酶，也就是通常我们说的RNase。实验非常简单，是在RNA中加入RNase测定RNase的活性。然后通过测紫外吸收，如果RNA被降解，吸收减小。

“One unit of enzyme was defined as the amount of protein causing an increase of absorption of 1.0 after 30 min of incubation“
这又是什么意思？
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3楼2013-01-07 15:00:25
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
就是用酶消化RNA底物30分钟，使其260nm吸光值减小1就定义为一个U。
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4楼2013-01-08 08:10:01
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浅笑包包

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-08 08:10:01
就是用酶消化RNA底物30分钟，使其260nm吸光值减小1就定义为一个U。

“increase of absorption of 1.0”不是增加1吗？
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5楼2013-01-08 09:08:31
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 浅笑包包 at 2013-01-08 09:08:31
“increase of absorption of 1.0”不是增加1吗？...

不好意思没注意啊，我觉得应该是减小才对呢。
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6楼2013-01-08 09:15:27
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浅笑包包

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-08 09:15:27
不好意思没注意啊，我觉得应该是减小才对呢。...

哦，那应该是增加吗？我是不太明白。
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7楼2013-01-09 14:45:55
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 浅笑包包 at 2013-01-09 14:45:55
哦，那应该是增加吗？我是不太明白。...

酶是分解RNA的，我认为应该是减小啊。
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8楼2013-01-09 14:51:17
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hqsinberg

木虫 (著名写手)

清风小木虫
★ ★
1949stone: 金币+2, 金币鼓励 看楼主的认可程度 在考虑epi 2013-01-09 15:24:32
引用回帖:
8楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-09 14:51:17
酶是分解RNA的，我认为应该是减小啊。...

吸光值是增加，n个单独的单个核苷酸的吸光值比其连接起来要大。原因：碱基堆积非共价键作用力造成的碱基压缩在一起，部分碱基的吸光值表现不出来。
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浅笑包包
9楼2013-01-09 14:54:50
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浅笑包包

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by hqsinberg at 2013-01-09 14:54:50
吸光值是增加，n个单独的单个核苷酸的吸光值比其连接起来要大。原因：碱基堆积非共价键作用力造成的碱基压缩在一起，部分碱基的吸光值表现不出来。...

谢谢~
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10楼2013-01-10 08:43:46
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