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向日葵的足迹铜虫 (初入文坛)
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酵母菌液RNA提取
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| 各位大侠，有谁做过酵母菌液RNA 提取的？求助一下是根据什么方法提的？谢谢。 |
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2楼2013-01-04 21:17:01
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【答案】应助回帖
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是菌体RNA吧，我这里有方法。你看一下。 预处理： 枪头、离心管等塑料制品在DEPC水中处理过夜。研钵、镊子、药勺等用锡箔纸包好180摄氏度烘8小时。如若着急，也可以将这些东西用酒精烧灼，满满的一研钵酒精点燃即可，据说此种方法更好。实验台面用酒精喷洒，操作时要求手套和口罩全副武装。 实验步骤：以TRIZOL法为基准。 1.液氮预冷研钵、研棒和药勺。 2.将样品倒入到液氮中，充分研磨。将粉末转移至已用DEPC处理过的离心管中。 3.加入1mlTRIZOL，吸打混匀后，冰上放置30min。 4.加入0.2ml氯仿后，冰上放置20min. 5.4摄氏度，13500rpm（如果有条件，可以设置到14000rpm甚至更高)离心15min。 6.将上层的水系转移到新的离心管中，加入0.5ml异丙醇（已经冰浴）混匀后，零下20摄氏度放置1h。 7.4摄氏度，13500rpm离心10min，离心后，可以看到胶状沉淀。 8.弃上清，用DEPC水配制的75%乙醇1ml洗涤，吸打混匀后，零下20摄氏度放置2h。 9.4摄氏度，13500rpm离心10min。 10.尽可能去除上清后，室温放置5-10min，吹干RNA。但是不可吹的过干，也不要过湿，否则RNA电泳效果很差。 11.向RNA中加入30ulDEPC水，其中20ul冻存于-80度冰箱中，另外10ul用于琼脂糖凝胶检测。 我现在做的就是酵母的RNA提取，如果有什么问题可以用Q聊。309075230，烟花错。 2.用 |
4楼2013-01-08 09:49:35
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