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cdmmore

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by Ag6501 at 2013-01-05 11:26:50
PCR的引物一般这样设：上游：载体-目标基因一段

                      下游：目标基因-载体一段...

谢谢，为什么两个引物都在目标基因上不好呢？
如果说是假阳性高，我这是特异性引物呀，难道还能从空载体上扩出跟我目标基因大小一样的条带？这个概率太低了呀
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11楼2013-01-07 16:43:25
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cdmmore

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-05 12:49:52
都在克隆片段上也可以，不过有可能出现克隆片段P出假阳性的可能。如果一个在载体上，一个在目的基因上，假阳性的概率变小，而且保证你筛选的质粒既含有载体又含有目的片段。当然，最好是是象9L那样设计。但是一般的 ...

谢谢，学习啦，下次换引物试试。
可是我还是没有明白为什么两个引物都在目标基因上不好呢？如果说是假阳性高，我这是特异性引物呀，难道还能从空载体上扩出跟我目标基因大小一样的条带？
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12楼2013-01-07 16:47:40
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by cdmmore at 2013-01-07 16:47:40
谢谢，学习啦，下次换引物试试。
可是我还是没有明白为什么两个引物都在目标基因上不好呢？如果说是假阳性高，我这是特异性引物呀，难道还能从空载体上扩出跟我目标基因大小一样的条带？...

理论上是没有问题。但实际操作上，往往模板是最容易污染的，尤其是克隆做多了慢慢就会理解的。总之，PCR的时候注意做对照，便于分析结果。
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13楼2013-01-08 07:39:26
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