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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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cdmmore

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引用回帖:
9楼: Originally posted by Ag6501 at 2013-01-05 11:26:50
PCR的引物一般这样设:上游:载体-目标基因一段

                      下游:目标基因-载体一段...

谢谢,为什么两个引物都在目标基因上不好呢?
如果说是假阳性高,我这是特异性引物呀,难道还能从空载体上扩出跟我目标基因大小一样的条带?这个概率太低了呀
11楼2013-01-07 16:43:25
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cdmmore

兑换贵宾

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引用回帖:
10楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-05 12:49:52
都在克隆片段上也可以,不过有可能出现克隆片段P出假阳性的可能。如果一个在载体上,一个在目的基因上,假阳性的概率变小,而且保证你筛选的质粒既含有载体又含有目的片段。当然,最好是是象9L那样设计。但是一般的 ...

谢谢,学习啦,下次换引物试试。
可是我还是没有明白为什么两个引物都在目标基因上不好呢?如果说是假阳性高,我这是特异性引物呀,难道还能从空载体上扩出跟我目标基因大小一样的条带?
12楼2013-01-07 16:47:40
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cicelyzh

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【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by cdmmore at 2013-01-07 16:47:40
谢谢,学习啦,下次换引物试试。
可是我还是没有明白为什么两个引物都在目标基因上不好呢?如果说是假阳性高,我这是特异性引物呀,难道还能从空载体上扩出跟我目标基因大小一样的条带?...

理论上是没有问题。但实际操作上,往往模板是最容易污染的,尤其是克隆做多了慢慢就会理解的。总之,PCR的时候注意做对照,便于分析结果。
13楼2013-01-08 07:39:26
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