24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1083  |  回复: 3

desheng101

木虫 (正式写手)

[交流] 好不容易得到的单克隆莫名其妙的没了 已有3人参与

花了几个月的时间做酶切连接,终于有一线希望。有单克隆挑取酶切鉴定测序基本能确定就是了。昨天把单克隆的菌质粒重新提取一下准备下一步,双酶切怎么也切不出来2条带,我真是无语了,以前能切出来,现在就一条带,貌似是载体的条带。实在不知道什么原因
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wxf-er

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
切不出来很正常,另外你提供的信息太少了,不好判断,给你说下可能的原因和验证方式。有很多原因造成酶切不出来:1.假阳性;2.确定有没转进去,可以先尝试做菌液PCR(挑单克隆后摇菌培养,用菌液直接做模板),做好对照。3.阳性PCR的菌液,再提质粒跑胶检测大小是否正确。4.酶切吧,做阴阳对照最好。如果前3步骤都正确,或者菌液PCR有阳性,可以先去测序验证,至于最后酶切--------
自然
2楼2013-01-01 01:59:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
用单酶切看一下质粒大小是不是对。此外,你的插入片段多大?可以看到载体大小片段,是不是小片段太暗没看清啊。做酶切的时候你是否做了载体酶切对照?确定得到的片段和载体一样大吗?会不会是有一个酶没起作用呢?
3楼2013-01-01 03:22:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ccharlien

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你不是有原来测序正确的质粒么
重新转进去就可以了 也不麻烦
长期保存还是保存质粒
4楼2013-01-03 03:33:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 desheng101 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 339求调剂 +3 hanwudada 2026-04-12 3/150 2026-04-12 21:43 by lbsjt
[教师之家] 山东双非院校考核超级无底线,领导幸灾乐祸,教师遭殃恐 +3 qut2026 2026-04-11 7/350 2026-04-12 20:24 by qut2026
[考研] 电气专硕320求调剂 +6 小麻子111 2026-04-10 6/300 2026-04-12 10:54 by lemon6009
[考研] 313求调剂 +5 余摆摆是大哥 2026-04-11 5/250 2026-04-12 10:34 by 猪会飞
[考研] 307求调剂 +10 tzq94092 2026-04-10 10/500 2026-04-12 08:18 by wise999
[考研] 一志愿西北工业大学289 085602 +33 yang婷 2026-04-10 34/1700 2026-04-12 08:11 by Art1977
[考研] 271求调剂 +20 2261744733 2026-04-11 22/1100 2026-04-11 23:14 by labixiaoqiao
[考研] 267求调剂 +8 再忙也要吃饭啊 2026-04-09 8/400 2026-04-11 21:42 by cfdbai
[考研] 求调剂 +6 电气300求调剂不 2026-04-08 6/300 2026-04-11 20:14 by 逆水乘风
[考研] 085400 328分 求调剂 +10 喂你一个大橙子 2026-04-09 14/700 2026-04-11 19:53 by lqspecial
[考研] 11408。358求调剂 +3 TMYzds 2026-04-07 3/150 2026-04-11 17:10 by 氮气气气
[考研] 一志愿985机械学硕380求调剂 +5 关关雎鸠10 2026-04-11 5/250 2026-04-11 10:10 by 知念。A
[考研] 一志愿京区985,085401,与本科专业一致,电子信息工程, +4 阳光开朗的男孩 2026-04-10 4/200 2026-04-10 18:27 by shenrf
[考研] 301求调剂 +5 149. 2026-04-10 5/250 2026-04-10 15:45 by 柴小白
[考研] 314求调剂 +14 weltZeng 2026-04-09 14/700 2026-04-09 23:14 by wolf97
[考研] 332,085601求调剂 +12 ydfyh 2026-04-09 14/700 2026-04-09 17:28 by wp06
[考研] 307求调剂 +14 超级伊昂大王 2026-04-06 14/700 2026-04-08 07:03 by 无际的草原
[考研] 本科生物信息学,总分362 求07 08调剂 +6 q小倩1210 2026-04-06 6/300 2026-04-07 19:40 by macy2011
[考研] 信工所11408 340分 本科西安交大自动化 +3 moontrek 2026-04-06 3/150 2026-04-07 09:56 by chongya
[考研] 327考研调剂推荐 +6 呜呜呜呜呢 2026-04-06 6/300 2026-04-06 21:39 by 啵啵啵0119
信息提示
请填处理意见