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hlwnxfd2011

银虫 (小有名气)

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[求助] DNA测序

请教一下各位前辈：是这样的，前几天送了两个样去测序公司，给的测序结果却是载体序列，也就是我的目的基因没有连到载体上，但我在做TA克隆时，用了蓝白斑筛选，并做了PCR鉴定，都是阳性，现在不知原因，请知道的前辈不吝赐教，感激不尽。

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1楼 2012-12-29 21:24:53

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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

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【答案】应助回帖

★ ★
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hlwnxfd2011: 金币+2, ★有帮助 2012-12-31 15:10:28

蓝白斑筛和PCR都可能出现假阳性，最好提一下质粒做酶切鉴定再送去测序。

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2楼2012-12-30 02:25:16

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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
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hlwnxfd2011: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-12-31 15:10:45

个人认为蓝白斑可以不做，基本上不能反映任何情况。可以选择酶切系统验证一下，最好是序列上有一个切点，载体片段上有另一个位点。pcr鉴定的话我一般都不会选择先前做pcr克隆序列时的引物，而是在序列中段设计一条新引物，这样还能得到理论上大小的片段的话，应该基本可以说是阳性。因为如果还使用原来的引物做，不管你得到的是不是目的片段都还是能检测到与原来p到条带一样大小的一个条带。

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3楼2012-12-30 14:19:37

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zhaodahe

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★
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hlwnxfd2011: 金币+2, ★有帮助 2012-12-31 15:10:56

提质粒看一下大小，差不多的再做测序。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

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4楼2012-12-30 15:54:50

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hlwnxfd2011

银虫 (小有名气)

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引用回帖:

3楼: Originally posted by junior850621 at 2012-12-30 14:19:37
个人认为蓝白斑可以不做，基本上不能反映任何情况。可以选择酶切系统验证一下，最好是序列上有一个切点，载体片段上有另一个位点。pcr鉴定的话我一般都不会选择先前做pcr克隆序列时的引物，而是在序列中段设计一条新 ...

谢谢您的指点。

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5楼2012-12-31 15:11:43

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