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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 免疫组化实验技术设计方案
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zoe_2012

金虫 (初入文坛)

[交流] 免疫组化实验技术设计方案

内容可深可浅，试验步骤定要严谨，有哪些可以参考的题目和实验方案呢？多多益善，集思广益
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1楼2012-12-22 20:35:17
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zoe_2012

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by piaoyingaza at 2012-12-24 11:20:32
（ 1 ）、石蜡切片脱蜡至水。 （ 2 ）、 3%H 2 O 2 室温孵育 5-10 分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。 （ 3 ）、蒸馏水冲洗， PBS 浸泡 5 分钟 x2 （如需抗原修复，可在此步后进行）。 （ 4 ）、 5-10% 正常山羊 ...

首先谢谢回帖，你这个是SP法吧，我看到好多实验基本都是用山羊血清封闭，这是为什么呢？
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3楼2012-12-26 09:07:28
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piaoyingaza

木虫 (著名写手)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
（ 1 ）、石蜡切片脱蜡至水。 （ 2 ）、 3%H 2 O 2 室温孵育 5-10 分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。 （ 3 ）、蒸馏水冲洗， PBS 浸泡 5 分钟 x2 （如需抗原修复，可在此步后进行）。 （ 4 ）、 5-10% 正常山羊血清（ PBS 稀释）封闭，室温孵育 10 分钟，倾去血清，勿洗。滴加 一抗 工作液， 37 ℃ 孵育 1-2 小时或 4 ℃ 过夜。 （ 5 ）、 PBS 冲洗， 5 分钟 x3 次。 （ 6 ）、滴加适量 生物素标记二抗 工作液， 37 ℃ 孵育 10-30 分钟。 （ 7 ）、 PBS 冲洗， 5 分钟 x3 次。 （ 8 ）、滴加适量的 辣根酶或碱性磷酸酶标记的链霉卵白素 工作液， 37 ℃ 孵育 10-30 分钟。 （ 9 ）、 PBS 冲洗， 5 分钟 x3 次。 （ 10 ）、显色剂显色 3-15 分钟（ DAB 或 NBT/BCIP ） （ 11 ）、自来水充分冲洗，复染，脱水，透明，封片。
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2楼2012-12-24 11:20:32
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piaoyingaza

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by zoe_2012 at 2012-12-26 09:07:28
首先谢谢回帖，你这个是SP法吧，我看到好多实验基本都是用山羊血清封闭，这是为什么呢？...

现在用山羊血清封闭已经成为通用的做法，具体可能是因为山羊血清较其他血清而言对底物有更好的更广泛的封闭性能
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4楼2012-12-26 10:31:10
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