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zoe_2012

金虫 (初入文坛)

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[交流] 免疫组化实验技术设计方案

内容可深可浅，试验步骤定要严谨，有哪些可以参考的题目和实验方案呢？多多益善，集思广益

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1楼2012-12-22 20:35:17

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piaoyingaza

木虫 (著名写手)

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★
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（ 1 ）、石蜡切片脱蜡至水。（ 2 ）、 3%H 2 O 2 室温孵育 5-10 分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。（ 3 ）、蒸馏水冲洗， PBS 浸泡 5 分钟 x2 （如需抗原修复，可在此步后进行）。（ 4 ）、 5-10% 正常山羊血清（ PBS 稀释）封闭，室温孵育 10 分钟，倾去血清，勿洗。滴加一抗工作液， 37 ℃ 孵育 1-2 小时或 4 ℃ 过夜。（ 5 ）、 PBS 冲洗， 5 分钟 x3 次。（ 6 ）、滴加适量生物素标记二抗工作液， 37 ℃ 孵育 10-30 分钟。（ 7 ）、 PBS 冲洗， 5 分钟 x3 次。（ 8 ）、滴加适量的辣根酶或碱性磷酸酶标记的链霉卵白素工作液， 37 ℃ 孵育 10-30 分钟。（ 9 ）、 PBS 冲洗， 5 分钟 x3 次。（ 10 ）、显色剂显色 3-15 分钟（ DAB 或 NBT/BCIP ）（ 11 ）、自来水充分冲洗，复染，脱水，透明，封片。

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2楼2012-12-24 11:20:32

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zoe_2012

金虫 (初入文坛)

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2楼: Originally posted by piaoyingaza at 2012-12-24 11:20:32
（ 1 ）、石蜡切片脱蜡至水。（ 2 ）、 3%H 2 O 2 室温孵育 5-10 分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。（ 3 ）、蒸馏水冲洗， PBS 浸泡 5 分钟 x2 （如需抗原修复，可在此步后进行）。（ 4 ）、 5-10% 正常山羊 ...

首先谢谢回帖，你这个是SP法吧，我看到好多实验基本都是用山羊血清封闭，这是为什么呢？

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3楼2012-12-26 09:07:28

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