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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 相同条件下，taq酶可以PCR出条带，而Primer star却不能
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bolix

铁虫 (正式写手)

[求助] 相同条件下，taq酶可以PCR出条带，而Primer star却不能

我正在从细菌基因组里扩增目的基因
起初用的taq酶，扩增出来很亮，但结果测序错了一个碱基
后来转用TAKARA的Primer star
相同条件下却扩增不出来了
降低退火温度到49度还是不行（Taq酶用的是55度）
请教大家，是什么原因？
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1楼 2012-12-20 12:47:25
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by bolix at 2012-12-24 09:49:47
1500bp
编码氨基酸已经变了...

1.5K有点长，最好用高保真的酶吧。
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11楼2012-12-24 12:24:31
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
肯定是taq酶效率高，多选几个，会有正确的吧
也可以用Platinum® Taq DNA Polymerase High Fidelity试试
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2楼2012-12-20 13:08:54
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不同的DNA聚合酶有不同的最适引物浓度和模板浓度。你可以参考一下说明书的建议。
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3楼2012-12-20 14:30:46
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
也正常的，Taq酶保真性差，但是扩增效果好；而Primer star保真性好，但效果不一定比Taq酶好。换扩增效果同Taq酶差不多的Taq-plus试试，或者你自己做个Taq-plus，Taq里面加点Pfu或者Primer star。
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4楼2012-12-20 14:49:07
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