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清风寨

银虫 (小有名气)

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[求助] 将两个基因串联到启动子下面，两个基因都能表达么？

想请问各位大侠，如果我将两个基因GFP、neo基因串联到A3启动子下游，两个基因都是完整的阅读框，中间用内切酶Not I酶切连接。下游再加上加尾信号和反向重复序列。这样子GFP和neo两个基因都能表达么？

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冷风过心变热

1楼2012-12-20 08:43:34

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alicelchf

木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
清风寨: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-12-23 15:45:35

一个Promoter可以控制多个蛋白的转录。但控制多长要看Promoter的强度，在PKS的基
因中，一个promoter控制多个蛋白的表达是很正常。
stop codon是在翻译这个环节来决定蛋白的终止跟promoter控制的转录是分子生物学中两个不同的事件。promoter负责DNA变成mRNA的，如果如够强的promoter,使连续3-5个基因发生转录是一点问题都没有的。
比如 pET28,
我们在NdeI和XhoI位点克隆一个基因，在基因的后面引入一个SpeI位点，将另一个已
经在pET28的基因用XbaI和SpeI切下来克隆到前一个克隆的SpeI位点上。两个基因先后promoter T7控制。但是每个基因有自己的RBS(ribosome binding site）和stop Codon,在翻译的时候核糖体会识别这一头一尾两个位点，表达出两个蛋白。强度肯定是越排在后面的越弱，但是每个蛋白翻译的速率和半衰期不一样，表达出的量也不同。