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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒测序后发现有重叠现象
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Cllair

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒测序后发现有重叠现象

之前将克隆的基因直接送测序一直说有重叠现象得不到测序结果。上次将转化后的大肠杆菌提取质粒送测序，结果还是有重叠现象。。。有点濒临崩溃的边缘，十分想请教各位虫友，大家有没有遇到过类似的情况，怎么解决的啊。
还有就是我想着直接送转化后的大肠杆菌去测序，之前查过资料说菌样测序的话结果可能不如质粒好。。。能给点相关的建议不？
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有今生没来世，且行且珍惜。
1楼 2012-12-18 19:57:58
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Cllair

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by liguanying at 2012-12-19 18:50:22
如果用的通用引物测序，你向测序公司要一下，他们测序用的引物，然后和你的基因序列比对一下。看看是不是和你的基因序列有同源性。如果你用的是自己的基因引物测序，看一下你的引物是不是特异性不好。

我一直用自己的引物，我也觉得自己的引物特异性不够好，下次测序打算用通用引物。
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有今生没来世，且行且珍惜。
11楼2012-12-20 09:30:50
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果质粒没有提好会影响测序结果。首先确定一定要挑单克隆。有时候两个克隆靠在一起的不要用。筛到了阳性克隆，可以直接送菌液测序。
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2楼2012-12-19 09:07:45
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fuding6

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
多换几个公司测试试
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3楼2012-12-19 10:43:11
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Cllair

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-19 09:07:45
如果质粒没有提好会影响测序结果。首先确定一定要挑单克隆。有时候两个克隆靠在一起的不要用。筛到了阳性克隆，可以直接送菌液测序。

我这次把之前单克隆影印的菌落摇菌送测序的应该没问题吧？其实我一直都调单菌落的，这个基因自从在我师姐手里的时候就测序过很多次，一直因为重叠没有得到序列，我都开始怀疑这个基因本身有问题了。。。
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有今生没来世，且行且珍惜。
4楼2012-12-19 11:11:58
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