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Tporker

金虫 (小有名气)

[求助] 表达的蛋白质偏小

最近表达的蛋白质总是偏小,不知道是何原因?大肠杆菌表达,质粒的序列进行测序,没有位点突变,并且完整。表达后的菌体收集冷冻直至进行破碎,通过镍柱和麦芽糖柱纯化以后,进行SDS-PAGE,发现纯化的蛋白质大小偏小。哪位大侠给帮帮忙,分析下会是哪方面的原因?感激不尽
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值,夜渐浓,闻窗外蛙鸣,辗转无眠难入梦;此,风渐清,听庭内雨应,悱恻浮醒忆青笼。
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wchuangqi

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我觉得那条大小正好的带可能是你的目的条带,那个小点的很可能是目的条带的降解,我没看到你的图所以不能确定。另外你用的麦芽糖洗脱的,应该是MBP标签的蛋白吧。那个小的会不会是MBP本身?如果是Mbp标签的话,就不会是镍柱了吧?
天道酬勤
8楼2012-12-12 15:40:20
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
SDS-PAGE下的表观分子量与理论值不符的情况时有发生。因为SDS-PAGE除了有分子筛效应以外,还有电荷效应。从胶上看小不一定真的就是分子量小。不用太纠结。
2楼2012-12-11 11:31:01
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aaa6239

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我也遇到了
我还以为是信号肽被切除所致。后来请教高手,人家说也可能是蛋白修饰或者电荷差异所致。
3楼2012-12-11 15:25:02
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Tporker

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-11 11:31:01
SDS-PAGE下的表观分子量与理论值不符的情况时有发生。因为SDS-PAGE除了有分子筛效应以外,还有电荷效应。从胶上看小不一定真的就是分子量小。不用太纠结。

变性胶,跑出来是两条带,一条大小正好,另一条偏小20KD且为主条带。进行活性测试,发现活性很低,基本是1U/μL或2U/μL
值,夜渐浓,闻窗外蛙鸣,辗转无眠难入梦;此,风渐清,听庭内雨应,悱恻浮醒忆青笼。
4楼2012-12-11 15:27:02
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