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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 表达的蛋白质偏小
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Tporker

金虫 (小有名气)

[求助] 表达的蛋白质偏小

最近表达的蛋白质总是偏小，不知道是何原因？大肠杆菌表达，质粒的序列进行测序，没有位点突变，并且完整。表达后的菌体收集冷冻直至进行破碎，通过镍柱和麦芽糖柱纯化以后，进行SDS-PAGE，发现纯化的蛋白质大小偏小。哪位大侠给帮帮忙，分析下会是哪方面的原因？感激不尽
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值，夜渐浓，闻窗外蛙鸣，辗转无眠难入梦；此，风渐清，听庭内雨应，悱恻浮醒忆青笼。
1楼 2012-12-11 09:27:23
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muchong5577

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
蛋白在SDS胶上的表观分子量，关于这个问题，有两篇文献曾报道过，内容跟2. 3 楼讲得差不多，希望对你有帮助。
1. Brady L, et al, Nature，1990,343:767-770
2.唐威华等，植物生理学报，2000,26：64-68
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6楼2012-12-12 09:27:18
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
SDS-PAGE下的表观分子量与理论值不符的情况时有发生。因为SDS-PAGE除了有分子筛效应以外，还有电荷效应。从胶上看小不一定真的就是分子量小。不用太纠结。
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2楼2012-12-11 11:31:01
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aaa6239

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也遇到了
我还以为是信号肽被切除所致。后来请教高手，人家说也可能是蛋白修饰或者电荷差异所致。
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3楼2012-12-11 15:25:02
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Tporker

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-11 11:31:01
SDS-PAGE下的表观分子量与理论值不符的情况时有发生。因为SDS-PAGE除了有分子筛效应以外，还有电荷效应。从胶上看小不一定真的就是分子量小。不用太纠结。

变性胶，跑出来是两条带，一条大小正好，另一条偏小20KD且为主条带。进行活性测试，发现活性很低，基本是1U/μL或2U/μL
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值，夜渐浓，闻窗外蛙鸣，辗转无眠难入梦；此，风渐清，听庭内雨应，悱恻浮醒忆青笼。
4楼2012-12-11 15:27:02
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