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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 透射电镜观察细胞形态
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lflishan

木虫 (正式写手)

[求助] 透射电镜观察细胞形态

想利用透射电镜观察药物作用于贴壁细胞后，细胞的变化，上网查操作写的都比较笼统，只是大致写了步骤，缺少细节。因为专业是药化，对细胞方面了解较少，希望有经验的虫子能传授下操作，比如需要什么密度的细胞，细胞量要多少，用什么来培养细胞（6孔板、小皿、细胞培养瓶）及加多少细胞液，给药体积是多少呢，用什么固定好（用什么洗，固定多久好呢？），固定完怎么保存？固定之后的包埋、制片会有专门老师操作，主要就是固定及之前养细胞的一些操作细节，请大家帮帮忙吧！如果有什么操作流程之类的，发邮箱也成（lflishan@163.com）非常感谢！
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1楼 2012-12-10 22:28:19
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western虫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lflishan: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-12-11 22:21:03
6孔板就行，10^5个细胞/ml，每孔2ml，24h后加药，给药体积能少就少，看药物溶解度，能溶于水就用培养基配，不行就用DMSO溶解。液体药就直接加。药物作用时间看你实验需要，固定用戊二醛。最后每个样品收集10^6细胞
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ForDream！
2楼2012-12-11 12:03:20
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lflishan

木虫 (正式写手)
★ ★
wizardfan: 金币+2, 细节决定成败 2012-12-12 07:41:23
引用回帖:
2楼: Originally posted by western虫 at 2012-12-11 12:03:20
6孔板就行，10^5个细胞/ml，每孔2ml，24h后加药，给药体积能少就少，看药物溶解度，能溶于水就用培养基配，不行就用DMSO溶解。液体药就直接加。药物作用时间看你实验需要，固定用戊二醛。最后每个样品收集10^6细胞

不好意思，那请问固定具体怎么做呢？是将细胞消化、离心后直接在离心管里加固定液吗？固定液浓度和时间怎么把握，固定后用PBS洗吗？还有最后每个样品收集的数量是固定前计数吗？因为实在不懂，问的问题太琐碎，麻烦您啦！
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3楼2012-12-11 22:20:54
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western虫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
lflishan: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-12-12 15:16:45
恩，细胞收集了加固定液，2%的戊二醛，加完快点轻轻吹打，细胞散开，可以过夜固定，不用你洗，直接送过去，计数液没必要的。细胞别损失太多就行了
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ForDream！
4楼2012-12-12 09:52:29
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lflishan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by western虫 at 2012-12-12 09:52:29
恩，细胞收集了加固定液，2%的戊二醛，加完快点轻轻吹打，细胞散开，可以过夜固定，不用你洗，直接送过去，计数液没必要的。细胞别损失太多就行了

谢谢您，我试试！
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5楼2012-12-12 15:17:03
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