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lflishan

木虫 (正式写手)

[求助] 透射电镜观察细胞形态

想利用透射电镜观察药物作用于贴壁细胞后,细胞的变化,上网查操作写的都比较笼统,只是大致写了步骤,缺少细节。因为专业是药化,对细胞方面了解较少,希望有经验的虫子能传授下操作,比如需要什么密度的细胞,细胞量要多少,用什么来培养细胞(6孔板、小皿、细胞培养瓶)及加多少细胞液,给药体积是多少呢,用什么固定好(用什么洗,固定多久好呢?),固定完怎么保存?固定之后的包埋、制片会有专门老师操作,主要就是固定及之前养细胞的一些操作细节,请大家帮帮忙吧!如果有什么操作流程之类的,发邮箱也成(lflishan@163.com)非常感谢!
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western虫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lflishan: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-12-11 22:21:03
6孔板就行,10^5个细胞/ml,每孔2ml,24h后加药,给药体积能少就少,看药物溶解度,能溶于水就用培养基配,不行就用DMSO溶解。液体药就直接加。药物作用时间看你实验需要,固定用戊二醛。最后每个样品收集10^6细胞
ForDream!
2楼2012-12-11 12:03:20
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lflishan

木虫 (正式写手)

★ ★
wizardfan: 金币+2, 细节决定成败 2012-12-12 07:41:23
引用回帖:
2楼: Originally posted by western虫 at 2012-12-11 12:03:20
6孔板就行,10^5个细胞/ml,每孔2ml,24h后加药,给药体积能少就少,看药物溶解度,能溶于水就用培养基配,不行就用DMSO溶解。液体药就直接加。药物作用时间看你实验需要,固定用戊二醛。最后每个样品收集10^6细胞

不好意思,那请问固定具体怎么做呢?是将细胞消化、离心后直接在离心管里加固定液吗?固定液浓度和时间怎么把握,固定后用PBS洗吗?还有最后每个样品收集的数量是固定前计数吗?因为实在不懂,问的问题太琐碎,麻烦您啦!
3楼2012-12-11 22:20:54
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western虫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
lflishan: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-12-12 15:16:45
恩,细胞收集了加固定液,2%的戊二醛,加完快点轻轻吹打,细胞散开,可以过夜固定,不用你洗,直接送过去,计数液没必要的。细胞别损失太多就行了
ForDream!
4楼2012-12-12 09:52:29
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lflishan

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by western虫 at 2012-12-12 09:52:29
恩,细胞收集了加固定液,2%的戊二醛,加完快点轻轻吹打,细胞散开,可以过夜固定,不用你洗,直接送过去,计数液没必要的。细胞别损失太多就行了

谢谢您,我试试!
5楼2012-12-12 15:17:03
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