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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 使用RACE技术扩不出基因的5‘和3’片段怎么回事
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spiritdaisy

新虫 (初入文坛)

[求助] 使用RACE技术扩不出基因的5‘和3’片段怎么回事

使用RACE技术扩不出基因的5‘片段和3’片段是怎么回事？试剂盒的阳性对照扩出来了，就是用我们自己的东西扩不出来条带，设计了几次引物，而且感觉RNA也没有问题，希望能有人帮忙指点。谢谢
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1楼 2012-12-09 14:33:16
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yoyo单眼皮

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是PCR反应体系的问题吧 应该摸索一下 做个梯度pcr
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2楼2012-12-09 15:38:14
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spiritdaisy

新虫 (初入文坛)
最初用Taq酶做梯度优化了，可是没有什么不同，RNA浓度也做梯度了，后来就按照SMARTerRACE技术的说明书的程序，
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3楼2012-12-12 20:41:05
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追梦的人1987

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

阳性对照出来了，说明试剂盒没有问题，是不是是不是引物设计的不是太好
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4楼2012-12-15 22:29:24
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spiritdaisy

新虫 (初入文坛)
引物设计了好几次了，不知道是不是引物问题

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2012-12-16 09:47:47
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追梦的人1987

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 追梦的人1987 at 2012-12-15 22:29:24
阳性对照出来了，说明试剂盒没有问题，是不是是不是引物设计的不是太好

也有可能是你的反应条件不适合，不行的话，换换反应条件
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6楼2012-12-16 10:28:30
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spiritdaisy

新虫 (初入文坛)
我就是按照试剂盒的程序进行的，那上面有两个反应程序，看引物的退火温度tm选程序的，退火温度大于70度的用时间短的程序，小于70度的用另外一个程序，是要优化程序吗?以前用taq酶优化过模板

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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7楼2012-12-16 13:28:14
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