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hallen6891

新虫 (小有名气)

tianhui725: 回帖置顶 2012-12-05 15:54:59
引用回帖:
10楼: Originally posted by tianhui725 at 2012-12-05 08:57:21
我用的是15ml的,是新的,不同细胞系提取的上清,都是5ml,离心半小时后所剩下的体积不同。可能我表述有误,我要的东西在上面。我现在就把滤得慢得再离心一会儿,只能达到每种差不多一致。不知这样对蛋白浓度有没有 ...

哦,不同细胞系所分泌的蛋白成分不一样的,那你出现这种情况应该正常,会对蛋白浓度有一定的影响,不过如果你的蛋白大小距离膜孔径较远(40KDa对应3KDa),那影响不大。超滤之后,计算好你的稀释倍数!祝试验顺利!
生活要好好过!
11楼2012-12-05 09:29:02
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tianhui725

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by hallen6891 at 2012-12-05 09:29:02
哦,不同细胞系所分泌的蛋白成分不一样的,那你出现这种情况应该正常,会对蛋白浓度有一定的影响,不过如果你的蛋白大小距离膜孔径较远(40KDa对应3KDa),那影响不大。超滤之后,计算好你的稀释倍数!祝试验顺利!...

只能大概计算一下了,做不到那么精确。每种最后控制在两百微升。谢谢啦!
12楼2012-12-05 15:52:29
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天蛇2012

新虫 (初入文坛)

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4楼: Originally posted by tianhui725 at 2012-12-04 10:33:46
浓缩前提取每种细胞的上清都是5ml,相同时间浓缩后所剩的毫升数不同,那么我以浓缩后的上清来做细胞因子的表达水平,进行对比的话,是不是已经不准确了?...

如果上清成份不完全相同当然会出现浓度后所剩体积不同,但是你可以自定一个量,不如浓缩5倍,哪个先到了就先取出,剩下的继续离心就可以了
13楼2012-12-05 17:15:32
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tianhui725

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 天蛇2012 at 2012-12-05 17:15:32
如果上清成份不完全相同当然会出现浓度后所剩体积不同,但是你可以自定一个量,不如浓缩5倍,哪个先到了就先取出,剩下的继续离心就可以了...

嗯。我现在就是这么做的,只能看那个刻度,大概判断一下。谢谢!
14楼2012-12-06 20:46:40
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溦馨

金虫 (小有名气)

准备纯化蛋白,能问下楼主15ml超滤管多少钱一个呀
15楼2013-11-14 14:17:25
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1223163317

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by tianhui725 at 2012-12-05 08:57:21
我用的是15ml的,是新的,不同细胞系提取的上清,都是5ml,离心半小时后所剩下的体积不同。可能我表述有误,我要的东西在上面。我现在就把滤得慢得再离心一会儿,只能达到每种差不多一致。不知这样对蛋白浓度有没有 ...

请问你们,15ml超滤刚买来新的具体怎么使用,第一次接触没有说明书,不知道怎么处理,离心多大转速等等,谢谢
16楼2015-01-04 20:15:14
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