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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请问有谁用过millipore的超滤管？
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tianhui725

铜虫 (初入文坛)

[求助] 请问有谁用过millipore的超滤管？

我想测细胞分泌的细胞因子，用millipore的超滤管将我需要的蛋白滤出，但是为什么相同体积（5ml）的上清，同时离心，剩下的液体体积却不同？有些剩下三百微升，有些五百微升。我该怎么控制将其条件设置成相同啊？求高人指点。
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1楼 2012-12-03 22:28:12
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hallen6891

新虫 (小有名气)
tianhui725: 回帖置顶 2012-12-05 15:54:59
引用回帖:
10楼: Originally posted by tianhui725 at 2012-12-05 08:57:21
我用的是15ml的，是新的，不同细胞系提取的上清，都是5ml，离心半小时后所剩下的体积不同。可能我表述有误，我要的东西在上面。我现在就把滤得慢得再离心一会儿，只能达到每种差不多一致。不知这样对蛋白浓度有没有 ...

哦，不同细胞系所分泌的蛋白成分不一样的，那你出现这种情况应该正常，会对蛋白浓度有一定的影响，不过如果你的蛋白大小距离膜孔径较远（40KDa对应3KDa），那影响不大。超滤之后，计算好你的稀释倍数！祝试验顺利！
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生活要好好过！
11楼2012-12-05 09:29:02
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tianhui725: 金币+1, ★有帮助 2012-12-04 10:36:13
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2012-12-04 12:22:29
浓缩的速度不会完全一样，样品中的蛋白浓度、杂质颗粒、缓冲液组分都有一定影响。最终的体积很难精确控制，如果体积大的样品，就稍微多离心一会。
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2楼2012-12-04 08:00:12
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hbgdzscc

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
tianhui725: 金币+1, ★有帮助 2012-12-04 10:36:27
管没用过，膜用过，可能与清洗不好有关，清洗终点要有量化的判断标准。不知道超滤时，你压力、时间等因素如何掌控。
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3楼2012-12-04 08:44:39
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tianhui725

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-04 08:00:12
浓缩的速度不会完全一样，样品中的蛋白浓度、杂质颗粒、缓冲液组分都有一定影响。最终的体积很难精确控制，如果体积大的样品，就稍微多离心一会。

浓缩前提取每种细胞的上清都是5ml，相同时间浓缩后所剩的毫升数不同，那么我以浓缩后的上清来做细胞因子的表达水平，进行对比的话，是不是已经不准确了？
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4楼2012-12-04 10:33:46
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