24小时热门版块排行榜    

查看: 1427  |  回复: 6

hdfsndy

铁虫 (初入文坛)

[求助] RP-HPLC分离蛋白质样品怎么出不了峰形好点的峰

本人最近在做RP-HPLC分离蛋白质
柱子:C8 孔径  250×4.6mm  300Å
A液: 100% 水     0.1% TFA
B液: 100% 乙腈   0.1% TFA
梯度:0-60min      20%B-100%B
温度:30℃
检测波长:280nm
样品为纯化后的蛋白(还有少量杂蛋白),目的蛋白分子量为21KD,PI为5.8-6.0,图1为空白溶剂,图2为蛋白样品,其中34min出来的可能是个柱子残留的杂质,请高手指导下,十分感谢!

1.jpg



2.jpg
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hdfsndy

铁虫 (初入文坛)

上面发错了,应该是C18的柱子
2楼2012-12-02 20:52:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

544082769

金虫 (正式写手)

命运-未来!

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xbqewpq: 金币+1, 感谢应助,欢迎常来分析版交流 2012-12-06 18:11:15
你用的参数是文献中的数据吗?我认为如果参数没错的话,你把流速降低试试。
自由的翅膀永远会飞翔的更远。
3楼2012-12-04 10:31:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hdfsndy

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 544082769 at 2012-12-04 10:31:18
你用的参数是文献中的数据吗?我认为如果参数没错的话,你把流速降低试试。

首先先谢谢您的回帖!我的蛋白是1个融合蛋白,参数都是自己摸索的,流速0.5ml/min也试过,效果也不好。现在想请问下,哪些参数或条件可以改下,
4楼2012-12-06 09:05:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

544082769

金虫 (正式写手)

命运-未来!

溶剂的极性
自由的翅膀永远会飞翔的更远。
5楼2012-12-06 09:20:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zizianzi

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


xbqewpq: 金币+1, 感谢应助,欢迎常来分析版交流 2012-12-06 18:11:24
应该和梯度洗脱有关,如果想得到好的峰型,如果样品很干净可以考虑等度。如果实在必须考虑梯度洗脱,建议在出峰那段时间保持等度试试。
6楼2012-12-06 10:59:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hdfsndy

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 544082769 at 2012-12-06 09:20:50
溶剂的极性

蛋白的溶剂是PB缓冲液的,不知道可以怎么改下,期待您的回复!
7楼2012-12-07 16:41:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hdfsndy 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 27/1350 2026-08-18 21:44 by Noways
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +3 瞬息宇宙 2026-08-15 3/150 2026-08-18 21:40 by xiaohuixin
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 9/450 2026-08-18 20:09 by 奶牛小黑
[基金申请] 朋友圈看到的 +4 wangzilk 2026-08-18 5/250 2026-08-18 19:25 by wangzilk
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +51 医学老男孩 2026-08-13 110/5500 2026-08-18 19:07 by icerianxia
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +8 基诺咪客 2026-08-17 11/550 2026-08-18 17:13 by 悠然熊猫
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +9 yuleib84 2026-08-18 10/500 2026-08-18 16:52 by archvillain
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
信息提示
请填处理意见