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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » RP-HPLC分离蛋白质样品怎么出不了峰形好点的峰
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hdfsndy

铁虫 (初入文坛)

[求助] RP-HPLC分离蛋白质样品怎么出不了峰形好点的峰

本人最近在做RP-HPLC分离蛋白质
柱子：C8 孔径  250×4.6mm  300Å
A液： 100% 水     0.1% TFA
B液： 100% 乙腈   0.1% TFA
梯度：0-60min      20%B-100%B
温度：30℃
检测波长：280nm
样品为纯化后的蛋白（还有少量杂蛋白），目的蛋白分子量为21KD，PI为5.8-6.0,图1为空白溶剂，图2为蛋白样品，其中34min出来的可能是个柱子残留的杂质，请高手指导下，十分感谢!

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1楼 2012-12-02 20:49:32
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hdfsndy

铁虫 (初入文坛)
上面发错了，应该是C18的柱子
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2楼2012-12-02 20:52:37
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544082769

金虫 (正式写手)

命运-未来！

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xbqewpq: 金币+1, 感谢应助，欢迎常来分析版交流 2012-12-06 18:11:15
你用的参数是文献中的数据吗？我认为如果参数没错的话，你把流速降低试试。
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自由的翅膀永远会飞翔的更远。
3楼2012-12-04 10:31:18
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hdfsndy

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 544082769 at 2012-12-04 10:31:18
你用的参数是文献中的数据吗？我认为如果参数没错的话，你把流速降低试试。

首先先谢谢您的回帖！我的蛋白是1个融合蛋白，参数都是自己摸索的，流速0.5ml/min也试过，效果也不好。现在想请问下，哪些参数或条件可以改下，
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4楼2012-12-06 09:05:19
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544082769

金虫 (正式写手)

命运-未来！
溶剂的极性
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自由的翅膀永远会飞翔的更远。
5楼2012-12-06 09:20:50
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zizianzi

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
xbqewpq: 金币+1, 感谢应助，欢迎常来分析版交流 2012-12-06 18:11:24
应该和梯度洗脱有关，如果想得到好的峰型，如果样品很干净可以考虑等度。如果实在必须考虑梯度洗脱，建议在出峰那段时间保持等度试试。
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6楼2012-12-06 10:59:03
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hdfsndy

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 544082769 at 2012-12-06 09:20:50
溶剂的极性

蛋白的溶剂是PB缓冲液的，不知道可以怎么改下，期待您的回复！
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7楼2012-12-07 16:41:07
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