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hdfsndy

铁虫 (初入文坛)

[求助] RP-HPLC分离蛋白质样品怎么出不了峰形好点的峰

本人最近在做RP-HPLC分离蛋白质
柱子:C8 孔径  250×4.6mm  300Å
A液: 100% 水     0.1% TFA
B液: 100% 乙腈   0.1% TFA
梯度:0-60min      20%B-100%B
温度:30℃
检测波长:280nm
样品为纯化后的蛋白(还有少量杂蛋白),目的蛋白分子量为21KD,PI为5.8-6.0,图1为空白溶剂,图2为蛋白样品,其中34min出来的可能是个柱子残留的杂质,请高手指导下,十分感谢!

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hdfsndy

铁虫 (初入文坛)

上面发错了,应该是C18的柱子
2楼2012-12-02 20:52:37
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544082769

金虫 (正式写手)

命运-未来!

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xbqewpq: 金币+1, 感谢应助,欢迎常来分析版交流 2012-12-06 18:11:15
你用的参数是文献中的数据吗?我认为如果参数没错的话,你把流速降低试试。
自由的翅膀永远会飞翔的更远。
3楼2012-12-04 10:31:18
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hdfsndy

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 544082769 at 2012-12-04 10:31:18
你用的参数是文献中的数据吗?我认为如果参数没错的话,你把流速降低试试。

首先先谢谢您的回帖!我的蛋白是1个融合蛋白,参数都是自己摸索的,流速0.5ml/min也试过,效果也不好。现在想请问下,哪些参数或条件可以改下,
4楼2012-12-06 09:05:19
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544082769

金虫 (正式写手)

命运-未来!

溶剂的极性
自由的翅膀永远会飞翔的更远。
5楼2012-12-06 09:20:50
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zizianzi

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


xbqewpq: 金币+1, 感谢应助,欢迎常来分析版交流 2012-12-06 18:11:24
应该和梯度洗脱有关,如果想得到好的峰型,如果样品很干净可以考虑等度。如果实在必须考虑梯度洗脱,建议在出峰那段时间保持等度试试。
6楼2012-12-06 10:59:03
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hdfsndy

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 544082769 at 2012-12-06 09:20:50
溶剂的极性

蛋白的溶剂是PB缓冲液的,不知道可以怎么改下,期待您的回复!
7楼2012-12-07 16:41:07
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