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lp_0820木虫 (著名写手)
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NO测量（氧合血红蛋白法）
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这个方法的英文版本我找到了，我就是不太明白最后那在分光光度计上是怎么测和计算的。 原文：NO concentrations were estimated by following the conversion of oxyhaemoglobin to methaemoglobin spectropho- tometrically at 577and 591nm. |
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【答案】应助回帖
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不知道楼主参考的哪篇文献，能否贴出来？ 氧合血红蛋白法是通过分光光度计测定氧合血红蛋白以及正铁血红蛋白对应吸光度值，将两者直接相减（或换算为蛋白量后再相减获得蛋白转化量）以反应NO含量的。在这个方法中，一般以A421 （HbO2）-A401 （MetHb）。楼主使用的是某种改进方法么？理论上讲可以用对应两种蛋白的吸光度相减以反映NO含量。但由于这个方法存在缺陷（ROS同样可以造成蛋白转化，加入抗氧化酶也无法抑制），因此目前没多少人使用这个方法测定了。如果不能很好地解决ROS干扰，最好不要选择氧合血红蛋白法。 相关知识，推荐几篇文章供楼主参考 Methods of nitric oxide detection in plants: A commentary Plant Science 181 (2011) 509– 519 NITRIC-OXIDE ASSAY USING HEMOGLOBIN METHOD METHODS IN ENZYMOLOGY 1994，233: 240-250 |
2楼2012-12-02 05:14:24
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NO content determination was performed accordingto Murphy andNoack(1994) with somemodifications.The fresh leaves (0.5g) were incubated with100 units of catalase and 100 units of superoxide dismutase for 5min to remove endogenous ROS beforeaddition of 5mL oxyhaemoglobin(5mM). After 2min incubation, NO concentrations were estimated byfollowing the conversion of oxyhaemoglobin to methaemoglobin spectropho- tometrically at577 and 591nm. 最新的文章中用这个方法的很多，比如plant physiology,planta等等 |
3楼2012-12-02 10:06:47
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