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混水小虫金虫 (小有名气)
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分步双酶切
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对质粒进行Hind III 和Sal I双酶切,因两个酶切位点离的太近(中间10个bp),请问是否应该采用分步酶切啊? 还有就是如果采用双酶切,这两个酶的酶切顺序如何确定啊? 在第一次酶切后,是不是必须要进行去磷酸化处理?看到之前的帖子上,说关于分步酶切中间的纯化步骤中,很多同学都没有说去磷酸化处理这个环节,是不是这一环节可以省略啊? 纯化方法哪个较好些啊?有些同学说是要电泳再割胶回收,有的说不电泳直接乙醇沉淀法回收,也有的人说不电泳直接加入溶胶buffer,开始回收! 请熟知这一方面的大虾给点帮助吧! |
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cicelyzh
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