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混水小虫金虫 (小有名气)
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[求助]
分步双酶切
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对质粒进行Hind III 和Sal I双酶切，因两个酶切位点离的太近（中间10个bp），请问是否应该采用分步酶切啊？ 还有就是如果采用双酶切，这两个酶的酶切顺序如何确定啊？ 在第一次酶切后，是不是必须要进行去磷酸化处理？看到之前的帖子上，说关于分步酶切中间的纯化步骤中，很多同学都没有说去磷酸化处理这个环节，是不是这一环节可以省略啊？ 纯化方法哪个较好些啊？有些同学说是要电泳再割胶回收，有的说不电泳直接乙醇沉淀法回收，也有的人说不电泳直接加入溶胶buffer，开始回收！ 请熟知这一方面的大虾给点帮助吧！ |
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