24小时热门版块排行榜    

查看: 2297  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

linerlove114

新虫 (初入文坛)

[求助] 有人测过NAD(P)H-醌还原酶(NADPH quinone reductase)的活性吗?

有人测过NAD(P)H-醌还原酶活性吗?我不知道这样翻译是不是准确,英文表述是
NADPH quinone reductase。 文献上给的体系是20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.2 mM NADPH or NADH, 0.1 mM quinone(醌)和1ul的酶液,然后用分光光度计测吸光值变化。可是醌是水不溶的啊,其他明显是水溶的,怎么反应啊?需要用什么有机溶剂溶解醌类与水互溶,同时又不影响酶活性?求助高手!!!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linerlove114

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by linerlove114 at 2012-12-01 17:25:51
非常感谢~你一定做过这个啦?乙醇、甲醇、DMSO不会影响蛋白活性吗?NADPH/NADH直接用水溶就可以吗?还是要用某种缓冲液溶解?...

你好,按照你上次跟我说的方法,用乙醇和DMSO溶过醌类,首先,我用的辅酶Q10和维生素K3在乙醇中溶解度挺小的,所以配的浓度并不高,然后按文献上给的浓度算好加一定体积进去之后,溶液就变浑浊了,这是怎么回事?浑浊会影响吸光值测定吧?
6楼2013-02-21 17:21:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
linerlove114: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-12-01 17:26:37
先配好Tris缓冲液。NADPH/NADH和醌是反应底物,测定时加样品后现加的。醌是用有机溶剂溶解的,可以用乙醇、甲醇或者DMSO先配置成浓缩的母液。
2楼2012-11-30 07:10:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linerlove114

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-30 07:10:05
先配好Tris缓冲液。NADPH/NADH和醌是反应底物,测定时加样品后现加的。醌是用有机溶剂溶解的,可以用乙醇、甲醇或者DMSO先配置成浓缩的母液。

非常感谢~你一定做过这个啦?乙醇、甲醇、DMSO不会影响蛋白活性吗?NADPH/NADH直接用水溶就可以吗?还是要用某种缓冲液溶解?
3楼2012-12-01 17:25:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


linerlove114: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-12-02 12:45:51
NADPH/NADH溶解在水里面,分装成小管,保存在-20°C,不要反复冻化。有机溶剂当然可能对酶活有一定影响,所以用量一定要少。一般根据实验需要醌配成100×或者200×的母液。
4楼2012-12-02 03:26:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 澳大利亚 Murdoch University 全奖博士招生(3个名额)地质化工冶金领域 +25 AI8RaGaPaSCR 2026-08-07 26/1300 2026-08-13 20:15 by YSLfXhguwSL6
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 28/1400 2026-08-13 17:51 by 医学老男孩
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +4 majunge000 2026-08-11 6/300 2026-08-13 16:50 by 四季常青藤
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 11/550 2026-08-13 10:40 by ZH远山
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +9 家与远方 2026-08-10 14/700 2026-08-13 09:41 by 臭臭不臭01
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
信息提示
请填处理意见