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linerlove114

新虫 (初入文坛)

[求助] 有人测过NAD(P)H-醌还原酶(NADPH quinone reductase)的活性吗?

有人测过NAD(P)H-醌还原酶活性吗?我不知道这样翻译是不是准确,英文表述是
NADPH quinone reductase。 文献上给的体系是20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.2 mM NADPH or NADH, 0.1 mM quinone(醌)和1ul的酶液,然后用分光光度计测吸光值变化。可是醌是水不溶的啊,其他明显是水溶的,怎么反应啊?需要用什么有机溶剂溶解醌类与水互溶,同时又不影响酶活性?求助高手!!!
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linerlove114

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by linerlove114 at 2012-12-01 17:25:51
非常感谢~你一定做过这个啦?乙醇、甲醇、DMSO不会影响蛋白活性吗?NADPH/NADH直接用水溶就可以吗?还是要用某种缓冲液溶解?...

你好,按照你上次跟我说的方法,用乙醇和DMSO溶过醌类,首先,我用的辅酶Q10和维生素K3在乙醇中溶解度挺小的,所以配的浓度并不高,然后按文献上给的浓度算好加一定体积进去之后,溶液就变浑浊了,这是怎么回事?浑浊会影响吸光值测定吧?
6楼2013-02-21 17:21:48
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
linerlove114: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-12-01 17:26:37
先配好Tris缓冲液。NADPH/NADH和醌是反应底物,测定时加样品后现加的。醌是用有机溶剂溶解的,可以用乙醇、甲醇或者DMSO先配置成浓缩的母液。
2楼2012-11-30 07:10:05
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linerlove114

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-30 07:10:05
先配好Tris缓冲液。NADPH/NADH和醌是反应底物,测定时加样品后现加的。醌是用有机溶剂溶解的,可以用乙醇、甲醇或者DMSO先配置成浓缩的母液。

非常感谢~你一定做过这个啦?乙醇、甲醇、DMSO不会影响蛋白活性吗?NADPH/NADH直接用水溶就可以吗?还是要用某种缓冲液溶解?
3楼2012-12-01 17:25:51
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


linerlove114: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-12-02 12:45:51
NADPH/NADH溶解在水里面,分装成小管,保存在-20°C,不要反复冻化。有机溶剂当然可能对酶活有一定影响,所以用量一定要少。一般根据实验需要醌配成100×或者200×的母液。
4楼2012-12-02 03:26:48
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