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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有人测过NAD(P)H-醌还原酶(NADPH quinone reductase)的活性吗？
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linerlove114

新虫 (初入文坛)

[求助] 有人测过NAD(P)H-醌还原酶(NADPH quinone reductase)的活性吗？

有人测过NAD(P)H-醌还原酶活性吗？我不知道这样翻译是不是准确，英文表述是
NADPH quinone reductase。 文献上给的体系是20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.2 mM NADPH or NADH, 0.1 mM quinone（醌）和1ul的酶液，然后用分光光度计测吸光值变化。可是醌是水不溶的啊，其他明显是水溶的，怎么反应啊？需要用什么有机溶剂溶解醌类与水互溶，同时又不影响酶活性？求助高手！！！
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1楼 2012-11-29 20:15:00
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
linerlove114: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-12-01 17:26:37
先配好Tris缓冲液。NADPH/NADH和醌是反应底物，测定时加样品后现加的。醌是用有机溶剂溶解的，可以用乙醇、甲醇或者DMSO先配置成浓缩的母液。
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2楼2012-11-30 07:10:05
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linerlove114

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-11-30 07:10:05
先配好Tris缓冲液。NADPH/NADH和醌是反应底物，测定时加样品后现加的。醌是用有机溶剂溶解的，可以用乙醇、甲醇或者DMSO先配置成浓缩的母液。

非常感谢~你一定做过这个啦？乙醇、甲醇、DMSO不会影响蛋白活性吗？NADPH/NADH直接用水溶就可以吗？还是要用某种缓冲液溶解？
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3楼2012-12-01 17:25:51
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
linerlove114: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-12-02 12:45:51
NADPH/NADH溶解在水里面，分装成小管，保存在-20°C，不要反复冻化。有机溶剂当然可能对酶活有一定影响，所以用量一定要少。一般根据实验需要醌配成100×或者200×的母液。
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4楼2012-12-02 03:26:48
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linerlove114

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-02 03:26:48
NADPH/NADH溶解在水里面，分装成小管，保存在-20°C，不要反复冻化。有机溶剂当然可能对酶活有一定影响，所以用量一定要少。一般根据实验需要醌配成100×或者200×的母液。

十分感谢~
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5楼2012-12-02 12:45:37
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linerlove114

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by linerlove114 at 2012-12-01 17:25:51
非常感谢~你一定做过这个啦？乙醇、甲醇、DMSO不会影响蛋白活性吗？NADPH/NADH直接用水溶就可以吗？还是要用某种缓冲液溶解？...

你好，按照你上次跟我说的方法，用乙醇和DMSO溶过醌类，首先，我用的辅酶Q10和维生素K3在乙醇中溶解度挺小的，所以配的浓度并不高，然后按文献上给的浓度算好加一定体积进去之后，溶液就变浑浊了，这是怎么回事？浑浊会影响吸光值测定吧？
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6楼2013-02-21 17:21:48
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LIVESOCCER

金虫 (正式写手)
楼主能给一下这个酶活性测定的方法文献么，感谢啊！
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7楼2019-09-26 11:52:12
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